本文關鍵詞：應用CS-SELEX技術篩選特異性結(jié)合丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS4B適配子的研究

  更多相關文章： 丙型肝炎病毒(HCV) 非結(jié)構(gòu)蛋白-NSB CS-SELEX 適配子

【摘要】：目的應用CS-SELEX(cell surface-system evolution of ligands by exponential enrichment)技術篩選與丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)非結(jié)構(gòu)蛋白4B(non protein 4B,NS4B)特異性結(jié)合的ssDNA適配子,建立檢測HCV NS4B的酶聯(lián)寡聚核苷酸吸附試驗(enzyme-linked oligonucleotide assay,ELONA)方法。方法構(gòu)建pDisplay-NS4B質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染至HepG2細胞中,在G418存在情況下連續(xù)篩選1個月,得到單克隆細胞群,經(jīng)過Western blot以及流式細胞術驗證,獲得穩(wěn)定表達NS4B的HepG2細胞。設計并合成隨機序列ssDNA文庫,以穩(wěn)定表達NS4B的細胞為正向篩選靶細胞,以HepG2細胞為反篩細胞進行CS-SELEX技術篩選。每輪篩選獲得的具有結(jié)合NS4B能力的ssDNA適配子,通過PCR擴增得到富集,隨后通過不對稱PCR獲得下一輪篩選的ssDNA文庫。經(jīng)過16輪篩選,將親和力最高的篩選產(chǎn)物克隆并測序,用ELONA方法檢測適配子的親和力。結(jié)果成功構(gòu)建表面展示表達重組質(zhì)粒pDisplay-NS4B。分別將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)入HepG2細胞,通過G418篩選獲得穩(wěn)定表達HCV-NS4B的細胞系NS4B-HepG2。對CS-SELEX篩選的各輪適配子庫進行親和力測定,其中第14輪庫適配子與NS4B的親合力最高。分別對第14輪庫中的單個適配子進行親和力測定,以適配子ZN1和ZN5與NS4B的親合力最高。ZN1和ZN5不僅能結(jié)合展示在細胞表面的NS4B蛋白,還能結(jié)合丙型肝炎病毒感染細胞(HCV cell culture,HCVcc)中的HCV-NS4B蛋白。結(jié)論適配子ZN1和ZN5對NS4B有高親和力,這對研究HCV-NS4B致癌機制、HCV診斷以及治療方面有潛在的應用價值。
【作者單位】： 武漢大學基礎醫(yī)學院免疫學系病毒學國家重點實驗室湖北省過敏及免疫相關疾病重點實驗室;
【基金】：國家重大傳染病專項(No.2012ZX10003002-015) 國家自然科學基金項目(No.31221061,31270176,81471910和31370197) 國家杰出青年基金項目(No.81025008)
【分類號】：R373.21
【正文快照】： ***據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計,全球約有3%,即1.7億~2.0億人感染丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)[1]。我國是HCV高感染率國家之一。HCV感染后,機體免疫系統(tǒng)往往不能將其清除,約80%的HCV感染者常發(fā)展成為慢性肝炎,其中有10%~***30%的患者發(fā)展為肝硬化、1%~5%發(fā)展為晚期肝癌(

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 詹林盛,孫紅琰,彭劍淳,邵寧生,王全立;丙型肝炎病毒核心蛋白寡核苷酸適配子的篩選與鑒定[J];中華微生物學和免疫學雜志;2002年05期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 祖立闖;王金良;李嬌;沈志強;;核酸適體及其在疫病診斷中的應用[J];動物醫(yī)學進展;2011年07期

2 楊倩;王全凱;宋戰(zhàn)昀;李敏思;張健;王振國;;結(jié)核分支桿菌核酸適配體研究進展[J];動物醫(yī)學進展;2014年12期

3 張振;趙子龍;徐麗;吳新姣;朱海珍;譚蔚泓;方曉紅;;基于核酸適體的丙肝病毒核心蛋白檢測新方法[J];中國科學:化學;2011年08期

4 劉珍寶;石依倩;陳長仁;段林花;王薪茹;;核酸適配體在腫瘤靶向治療中應用的研究進展[J];科學通報;2014年14期

5 夏方娜;謝龍金;潘小玲;鄒淑慧;劉金輝;;丙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白的研究進展[J];南昌大學學報(醫(yī)學版);2014年10期

6 郎春燕;江樹勛;邵碧英;陳文炳;傅碧忠;繆婷玉;陳融斌;黃曉蓉;;應用SELEX技術篩選沙門氏菌抗原的適配子[J];食品科學;2011年13期

7 李真真;韓躍武;劉玲玲;韓亞萍;路艷;王春霞;;SELEX法體外篩選胃癌細胞適配子方法的建立[J];生物技術;2009年03期

8 鄒綺;王元凱;毛紫微;杜斌;王恒安;孫建和;嚴亞賢;;2種不同方法制備玉米赤霉烯酮單克隆抗體適配子的ssDNA文庫的比較[J];上海交通大學學報(農(nóng)業(yè)科學版);2013年05期

9 周菁;陳軍;任易;陳麗峰;;利用適配子篩選結(jié)核桿菌H37Rv毒力基因方法探討[J];山東醫(yī)藥;2013年38期

10 陸鑫蔚;胡小龍;張玉榮;孫美琪;曹芳琦;黃琴蓉;曾立波;;SELEX技術篩選甲基苯丙胺適配子[J];中國司法鑒定;2014年01期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 甘賢雪;基于金屬納米材料及酶構(gòu)建電致化學發(fā)光適配體傳感器的研究[D];西南大學;2013年

2 向水;SOCS3在靜脈移植物再狹窄中的作用及機制研究[D];華中科技大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李衛(wèi)濱;篩選環(huán)孢霉素A適體的Bio Mag-SELEX方法的建立[D];福建醫(yī)科大學;2006年

2 許少涵;體外SELEX法篩選淋病奈瑟菌適體方法的建立[D];福建醫(yī)科大學;2007年

3 馮香玲;采用SELEX技術篩選脫氧雪腐鐮刀菌烯醇適配子的初步研究[D];南昌大學;2007年

4 李真真;SELEX法體外篩選胃癌細胞SGC-7901適配子方法的建立[D];蘭州大學;2009年

5 劉玲玲;慢性粒細胞白血病K562細胞適配子的篩選、鑒定與結(jié)構(gòu)分析[D];蘭州大學;2009年

6 鄒綺;采用SELEX技術篩選玉米赤霉烯酮單克隆抗體DNA適配子的初步研究[D];上海交通大學;2013年

7 王鑫;鏈球菌適配體制備及應用[D];江南大學;2013年

8 連英琪;SELEX技術體外篩選單增李斯特菌適配子及其熒光快速檢測方法的建立[D];合肥工業(yè)大學;2013年

9 余琴琴;靶向HCV包膜蛋白的信標適體應用于病毒檢測的研究[D];湖南大學;2013年

10 戚應杰;慢性丙型肝炎患者血清球蛋白水平與病毒載量的相關性研究[D];安徽醫(yī)科大學;2012年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 方宗熙,戴繼勛;單倍體在海帶遺傳研究中的應用[J];遺傳學報;1980年01期

2 劉德全;體外培養(yǎng)惡性瘧原蟲產(chǎn)生配子體的電子顯微鏡觀察[J];國外醫(yī)學(寄生蟲病分冊);1982年06期

3 洪凌仙;倪子綿;林宇光;;鴿血變蟲(Haemoproteus columbae)配子發(fā)生時期的配子體和配子的超微結(jié)構(gòu)[J];武夷科學;1992年00期

4 藍興國,于曉敏,李玉花;配子體自交不親和信號轉(zhuǎn)導的研究進展[J];遺傳;2005年04期

5 方宗熙;海帶和裙帶菜配子體無性生殖系培育成功[J];自然雜志;1979年06期

6 張明方,陳竹君;配子體型自交不親和機理[J];植物生理學通訊;1997年02期

7 楊小華;植物配子體自交不親和性的生物學基礎[J];廣西師范大學學報(自然科學版);1999年01期

8 曾艷玲,譚曉風,楊谷良;配子體自交不親和基因產(chǎn)物作用機制研究進展[J];中南林學院學報;2005年04期

9 王伏雄;;水松的配子體[J];Journal of Integrative Plant Biology;1952年01期

10 張琳;譚曉風;烏云塔娜;;配子體自交不親和雄性決定因子的鑒別及其功能研究進展(英文)[J];Journal of Forestry Research;2006年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 張光飛;楊小利;楊慧;賀曉鋒;郭曉榮;蘇文華;;鐵線蕨配子體和孢子體葉綠素熒光參數(shù)比較[A];中國植物學會七十五周年年會論文摘要匯編（1933-2008）[C];2008年

2 張光飛;楊慧;賀曉鋒;郭曉榮;蘇文華;;蜈蚣蕨孢子體和配子體的葉綠素熒光特性比較[A];紀念殷宏章先生百年誕辰暨全國光合作用學術研討會論文摘要匯編[C];2008年

3 龐通;劉建國;林偉;;長心卡帕藻四分孢子形成釋放和萌發(fā)及配子體苗形態(tài)建成過程[A];慶祝中國藻類學會成立30周年暨第十五次學術討論會摘要集[C];2009年

4 張栩;李大鵬;戴勇超;張曉燕;蔡昭鈴;叢威;歐陽藩;;裙帶菜配子體的色素組成及光合呼吸特性[A];中國科學院海洋科學青年學術研討會暨2001年海洋湖沼科學青年學者論壇論文摘要集[C];2001年

5 陳晶;王麗麗;石微微;周志剛;;海帶配子體srp基因的克隆及在大腸桿菌中的表達[A];慶祝中國藻類學會成立30周年暨第十五次學術討論會摘要集[C];2009年

6 周志剛;劉宇;畢燕會;劉艷省;李利華;吳文凱;;海帶配子體性別相關分子標記的研究[A];2011全國植物生物學研討會論文集[C];2011年

7 沈文輝;;植物染色質(zhì)結(jié)構(gòu)重要調(diào)控蛋白質(zhì)的功能研究[A];生命的分子機器及其調(diào)控網(wǎng)絡——2012年全國生物化學與分子生物學學術大會摘要集[C];2012年

8 鄧蘊彥;湯曉榮;黃冰心;丁蘭平;;強壯硬毛藻(Chaetomorpha valida)的溫度性質(zhì)及其在中國海藻區(qū)系中的擴散潛力[A];中國藻類學會第八次會員代表大會暨第十六次學術討論會論文摘要集[C];2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張亦陳;利用海帶配子體營養(yǎng)增殖體系實現(xiàn)外源基因表達[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2005年

2 徐滌;海帶外生菌的初步研究[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2003年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 李曉捷;海帶配子體克隆培養(yǎng)技術研究[D];中國海洋大學;2003年

2 熊艷;裙帶菜配子體遺傳轉(zhuǎn)化的相關研究[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2005年

3 高江濤;光生物反應器高效增殖轉(zhuǎn)基因海帶配子體細胞的初步研究[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2005年

4 柳葵葵;條斑紫菜孢子體與配子體PSⅡ的特性以及單顆粒分析[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2006年

5 王金鋒;紅毛菜科海藻色素突變特征及其配子體初期發(fā)育模式的研究[D];南京師范大學;2007年

6 王迪;裙帶菜的種質(zhì)鑒定及其遺傳背景的研究[D];中國科學院研究生院（海洋研究所）;2005年

7 熊軍;沙田柚配子體自交不親和花柱消減文庫的構(gòu)建及差異表達基因的分析[D];廣西師范大學;2008年

8 聶瑞軍;乳突麗藻（Nitella papillata）的細胞形態(tài)學研究[D];四川大學;2005年

，

本文編號：1289782