本文關(guān)鍵詞：伯氏瘧原蟲CSP基因N端蛋白靶向肝細(xì)胞的研究

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【摘要】：目的研究伯氏瘧原蟲CSP基因的N端蛋白與小鼠肝細(xì)胞膜HPSGs受體結(jié)合后在體外、體內(nèi)的肝組織靶向性。方法將伯氏瘧原蟲CSP基因N端片段(PbCSP-N)克隆入原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28α,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,經(jīng)親和層析純化后采用Western blot方法鑒定;采用Pull-down方法檢測(cè)PbCSP-N蛋白與小鼠肝細(xì)胞表面受體硫酸乙酰肝素糖蛋白(Heparan sulfate proteoglycan,HSPG)的結(jié)合力;應(yīng)用免疫組化、放射性碘標(biāo)記示蹤方法檢測(cè)該蛋白在體外、體內(nèi)特異性靶向小鼠肝組織作用。結(jié)果成功構(gòu)建PbCSP-N原核表達(dá)質(zhì)粒并表達(dá)、純化出PbCSP-N重組蛋白(15ku),Pull-down方法證實(shí)該蛋白可與小鼠肝細(xì)胞膜HPSGs受體結(jié)合,免疫組化試驗(yàn)顯示該重組蛋白定位于正常小鼠肝細(xì)胞膜,表明該蛋白可特異結(jié)合正常小鼠肝細(xì)胞膜;放射性碘(125I)標(biāo)記示蹤顯示,標(biāo)記的重組蛋白在注射1、2、4、6、12h后在小鼠肝臟分布較多,表明該重組蛋白可靶向正常小鼠肝組織。結(jié)論伯氏瘧原蟲CSP基因N端蛋白與肝細(xì)胞膜HPSGs受體結(jié)合后在體內(nèi)、外靶向肝細(xì)胞,可作為肝細(xì)胞靶向性藥物候選分子。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;襄陽(yáng)市第一人民醫(yī)院;
【基金】：廣州市屬高�？萍加�(jì)劃項(xiàng)目(No.08A097,No.10A173) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項(xiàng)目(No.B2012165) 廣州市重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(No.B127007) 廣東省高等教育教學(xué)改革項(xiàng)目(No.GDJG20142273)
【分類號(hào)】：R382
【正文快照】： ***當(dāng)感染瘧原蟲按蚊叮咬中間宿主后,瘧原蟲子孢子進(jìn)入宿主血液循環(huán),30min內(nèi)便可入侵肝細(xì)胞[1]。子孢子之所以能迅速特異入侵肝細(xì)胞,主要是由于子孢子表面的環(huán)子孢子蛋白(Circumsporozoite protein,CSP)能夠與肝細(xì)胞表面受體硫酸乙酰肝素糖蛋白(heparan sulfate proteoglycan,

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本文編號(hào)：1280816