本文關鍵詞：人胚胎干細胞向子宮內(nèi)膜上皮樣細胞誘導分化前后遺傳穩(wěn)定性的相關研究

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【摘要】：育齡期女性子宮內(nèi)膜由基底層及功能層組成，在雌、孕激素等固醇類激素作用下發(fā)生周期性的變化。胚胎著床后，子宮內(nèi)膜迅速發(fā)生蛻膜化，為妊娠的建立及維持提供支撐。適宜的子宮內(nèi)膜厚度是胚胎著床的必要條件之一。 胚胎干細胞(embryonic stem cell，ES細胞)是來源于囊胚內(nèi)細胞團的一種高度未分化細胞，具有無限增殖和發(fā)育全能性等特點。由于其分化方面的多能性，，它被科學家們及眾多醫(yī)學領域?qū)＜壹挠枇撕裢�。被認為或?qū)⒖梢栽谠偕t(yī)學中發(fā)揮巨大作用。由于先天性、疾病性、人工刮宮等原因，導致子宮內(nèi)膜始終較薄，許多女性患者無法正常進行生育。這種現(xiàn)象在輔助生殖技術中極為常見。 人胚胎干細胞（human embryonic stem cells, hESCs）理論上可定向分化為包括生殖細胞在內(nèi)的各種細胞�；谶@一設想，我們認為可以通過人胚胎干細胞體外培養(yǎng)，模擬體內(nèi)環(huán)境使其向子宮內(nèi)膜上皮樣細胞誘導分化。目前有學者將成體干細胞試圖誘導成子宮內(nèi)膜上皮樣細胞，也有學者通過重建損傷小鼠子宮內(nèi)膜行胚胎干細胞移植，進行胚胎干細胞或成體干細胞在損傷或薄型子宮內(nèi)膜治療、修復方面的探討。于此同時，我中心的實驗團隊在近幾年里，也在人胚胎干細胞向子宮內(nèi)膜上皮樣細胞誘導分化的研究中進行過摸索。這些研究主要包括人胚胎干細胞向子宮內(nèi)膜上皮樣細胞誘導分化方案的探索以及在這一過程中的某些通路因子對高效誘導分化所起的作用。 通過基因芯片技術可以全面的了解不同位點誘導前后的樣本DNA變化情況，并通過數(shù)據(jù)庫找出相關突變基因的功能。目前，鮮見關于子宮內(nèi)膜上皮樣細胞誘導過程中遺傳學穩(wěn)定性的相關報道。 目的： 通過SNP芯片掃描檢測的方法，分析hESC系在誘導分化為子宮內(nèi)膜上皮樣細胞前后基因遺傳特征及其變化情況，從而探索出更為成熟安全的誘導分化方案，為今后細胞移植的安全性提供實驗數(shù)據(jù)和理論基礎。 方法： 1.體外通過擬胚體途徑將hESCs定向分化為子宮內(nèi)膜樣細胞，光鏡觀察子宮內(nèi)膜樣細胞形態(tài)。免疫熒光檢測子宮內(nèi)膜樣細胞的特異性標志物角蛋白。 2.提取內(nèi)膜樣細胞的基因組DNA，按胚胎干細胞系來源分為早期、晚期代數(shù)不同的組別通過cytoSNP芯片檢測誘導分化前后的不同代次細胞遺傳變化。 結(jié)果： 本實驗共進行四組hESCs誘導分化前后的實驗數(shù)據(jù)對比，共六個樣本。四組樣本分別進行質(zhì)量檢測后進行芯片結(jié)果的兩兩互相比較。組1和組2的早期代數(shù)hESCs進行誘導分化后突變SNP位點達2300個，組3晚期代數(shù)的hESCs進行誘導分化后突變SNP位點達3770個，組4動態(tài)觀察了早期傳代至晚期的誘導分化后的子宮內(nèi)膜上皮樣細胞其上的突變SNP位點達到6956個。 結(jié)論： 1.應用擬胚體途徑添加17-β雌二醇等誘導分化因子可成功將人胚胎干細胞誘導分化為子宮內(nèi)膜上皮樣細胞。 2.晚期代數(shù)較早期代數(shù)誘導分化過程中，隨著細胞代數(shù)的增加，SNP變異的幾率增加、變異數(shù)量逐漸增大。誘導分化早期代數(shù)的子宮內(nèi)膜上皮樣細胞較晚期代數(shù)遺傳穩(wěn)定性更好。 3.在將人胚胎干細胞誘導分化為子宮內(nèi)膜上皮樣細胞的過程中代數(shù)相差20代時變異位點達到7000個。位于1號染色體、7號染色體的外顯子突變最為顯著。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329

【參考文獻】

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王永剛;大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向子宮內(nèi)膜細胞分化的體外實驗[D];中南大學;2012年

本文編號：1277079