本文關(guān)鍵詞：microRNA-144抑制小鼠RAW264.7巨噬細胞三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1表達

  更多相關(guān)文章： microRNA-144 三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1 RAW264.7巨噬細胞

【摘要】：目的：構(gòu)建miR-144真核表達載體，檢測miR-144是否調(diào)控小鼠RAW264.7巨噬細胞三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1（ABCA1）的表達。 方法：結(jié)合文獻，通過預(yù)測軟件分析，選取評分較高、可作用于ABCA1mRNA3’非編碼區(qū)（ABCA1mRNA3’UTR）的miR-144。通過分子克隆技術(shù)，利用PCR擴增miR-144和ABCA1mRNA3’UTR的DNA序列，酶切膠回收后，分別連接至真核表達載體pcDNA3.1（+）載體和pcDNA3.1（+）-luciferase載體上。測序后，運用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測螢火蟲熒光素酶的活性，觀察microRNA-144是否對ABCA1mRNA3’UTR具有直接靶向作用。運用LipofectamineTM2000將pcDNA3.1（+）空載體、pcDNA3.1（+）-miR-144轉(zhuǎn)染至小鼠RAW264.7巨噬細胞。通過實時定量PCR(qRT-PCR)檢測轉(zhuǎn)染后miR-144的表達含量。通過qRT-PCR和Western blot法檢測過表達miR-144后ABCA1在mRNA和蛋白水平的變化。 結(jié)果：miR-144PCR產(chǎn)物連接至pcDNA3.1（+）載體上，ABCA1mRNA3’UTR連接至pcDNA3.1（+）-luciferase載體上，測序正確。運用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn)，和對照組（聯(lián)合轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）空載、pcDNA3.1（+）-luciferase-ABCA13’ UTR和PRL-SV40）相比，實驗組（聯(lián)合轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）-miR144、pcDNA3.1（+）-luciferase-ABCA13’ UTR和PRL-SV40可以顯著降低螢火蟲熒光素酶的活性（P＜0.05），證明microRNA-144對ABCA1mRNA3’UTR具有直接靶向作用。將pcDNA3.1（+）空載、pcDNA3.1（+）-miR-144轉(zhuǎn)染至小鼠RAW264.7細胞中，，qRT-PCR結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）空載組microRNA-144表達無明顯變化（P＞0.05）；轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）-miR-144組中miR-144表達量顯著增高（P＜0.01）.qRT-PCR結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）空載和pcDNA3.1（+）-microRNA-144對ABCA1mRNA表達水平無明顯影響（P＞0.05），Western blot結(jié)果顯示，與pcDNA3.1（+）空載組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1（+）-microRNA-144可以顯著降低ABCA1蛋白水平的表達（P＜0.01）。 結(jié)論：miR-144可以在轉(zhuǎn)錄后水平抑制ABCA1蛋白的表達。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于瑞杰;汪俊軍;;microRNA在動脈粥樣硬化發(fā)病機制中的作用[J];醫(yī)學研究生學報;2013年09期

2 張和細;龔輝;;miRNA與動脈粥樣硬化研究進展[J];中華實用診斷與治療雜志;2014年01期

3 梁斌;蔣曉;邊云飛;肖傳實;;MicroRNA在膽固醇逆轉(zhuǎn)運中的調(diào)節(jié)作用[J];中國動脈硬化雜志;2014年02期

4 陳文標;黃建溶;戴勇;;膜性腎病差異性表達microRNA的靶基因功能分析[J];暨南大學學報(自然科學與醫(yī)學版);2014年04期

5 劉婷;王靜;汪俊軍;;脂質(zhì)相關(guān)miRNA研究進展[J];臨床檢驗雜志;2014年07期

6 李素芳;任景怡;耿強;陳紅;;膽固醇穩(wěn)態(tài)與微小RNA的調(diào)節(jié)[J];中華老年心腦血管病雜志;2014年08期

7 陳文標;黃建溶;喻祥琪;彭武建;林小聰;戴勇;;高通量測序篩查特發(fā)性膜性腎病患者外周血細胞microRNA的差異性表達[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2014年11期

8 張小鵬;劉鋒;王煒;;p53信號網(wǎng)絡(luò)的非線性動力學研究[J];中國科學:物理學 力學 天文學;2014年12期

9 黃風塵;王靜;單秋麗;杜宇國;;MicroRNA:POPs誘導動脈粥樣硬化的潛在調(diào)控者[J];生態(tài)毒理學報;2014年01期

10 萬靜枝;袁丁;鄧麗麗;張長城;劉朝奇;周志勇;王婷;;SH-SY5Y神經(jīng)細胞氧化損傷時microRNA-199a和Sirt1表達變化[J];生物技術(shù);2014年02期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳晨;miR-135a和miR-183對3T3-L1前脂肪細胞分化及脂肪形成的調(diào)控作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2013年

2 林先滋;奶山羊乳腺組織乳脂代謝相關(guān)miRNAs的篩選及功能驗證[D];西北農(nóng)林科技大學;2013年

3 李成林;miR-210抑制食管Eca109細胞生長的機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2014年

4 蘇東曉;荔枝果肉多酚的分離鑒定及其調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝作用機制[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2014年

5 彭永東;miR-224、miR-146b、miR-215和miR-135a 對脂肪細胞分化和脂質(zhì)代謝的作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2014年

6 荊文;低氧訓練對高脂飲食大鼠肝臟microRNA表達及脂代謝的調(diào)節(jié)研究[D];上海體育學院;2014年

7 莫曉媚;肺癌細胞株中miRNA的篩選及miR-544a促進肺癌細胞轉(zhuǎn)移的機制研究[D];中國海洋大學;2014年

8 馮潔;MicroRNA-296對腦缺血梗死后血管新生的調(diào)控機制研究[D];中南大學;2014年

9 劉玲娟;microRNA-204調(diào)控驚厥性腦損傷的機制研究[D];中南大學;2014年

10 呂運成;miR-19b靶向調(diào)控巨噬細胞ABCA1對apoE~(-/-)鼠動脈粥樣硬化的影響[D];南華大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王建敏;不同血液凈化方式尿毒癥患者血清對THP-1巨噬細胞microRNA33a的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

2 向羿;嚴重冠心病患者血清ABCA1水平與側(cè)支循環(huán)形成的相關(guān)性研究[D];中南大學;2013年

3 耿旭;PAPP-A與冠心病關(guān)系的研究進展[D];蚌埠醫(yī)學院;2014年

4 劉穎;miR-29b-3p在不穩(wěn)定型心絞痛患者血漿的表達及其功能研究[D];河北醫(yī)科大學;2014年

5 劉美英;脂蛋白脂酶基因多態(tài)性與2型糖尿病和血脂關(guān)系的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2014年

6 楊靈;非諾貝特通過ABCA1及ABCG1途徑對泡沫細胞內(nèi)膽固醇含量的影響及機制[D];山西醫(yī)科大學;2014年

7 冉琴;替米沙坦對THP-1源泡沫細胞ABCA1及ABCG1表達和膽固醇流出的影響[D];山西醫(yī)科大學;2014年

8 邱明濤;動脈粥樣硬化microRNA表達譜的研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

9 文璐;miRNAs的表達與原發(fā)性IgA腎病病情相關(guān)性初步研究[D];鄭州大學;2014年

10 曹峻榮;miR-144靶向ROCK1抑制肝癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的研究[D];南華大學;2014年

本文編號：1262993