發(fā)布時間：2017-12-02 18:29

  本文關鍵詞：自噬在慢性砷誘導的人支氣管上皮細胞轉化中的作用

  更多相關文章： 肺支氣管上皮細胞 亞砷酸鈉 上皮間質轉化 自噬 炎性體

【摘要】：目的： 長期暴露于砷污染中時可以誘導多種腫瘤的發(fā)生。皮間質轉化（Epithelial-mesenchymal Transition）是腫瘤發(fā)生的一個重要步驟，自噬是細胞用來對抗自身轉化的自我保護機制，本文旨在探討人支氣管上皮細胞BEAS-2B經(jīng)慢性亞砷酸鈉誘導后，自噬在BEAS-2B轉化中的作用。 方法： 1. BEAS-2B細胞處理 用2.5ummol/L亞砷酸鈉誘導48h為急性砷誘導；用0.25ummol/L亞砷酸鈉誘導66天為慢性砷誘導；對照組BEAS-2B相同條件無亞砷酸鈉培養(yǎng)66天；Beclin-1shRNA質粒轉染BEAS-2B細胞抑制自噬；10nM雷帕霉素作用BEAS-2B細胞24h增強自噬；10nM巴弗洛霉素A1作用BEAS-2B細胞24h抑制自噬。 2.集落形成實驗 經(jīng)0.25uM亞砷酸鈉暴露培養(yǎng)66天的BEAS-2B細胞，進行軟瓊脂集落形成實驗，14天后顯微鏡下觀察克隆形成情況，挑取細胞克隆消化培養(yǎng)為轉化細胞。 3.自噬檢測 Western Blot檢測各組自噬標志蛋白Beclin-1，LC3Ⅱ，P62，觀察自噬的活性；細胞經(jīng)單丹磺酰戊二胺染色（MDC）染色,熒光顯微鏡觀察自噬小體綠色熒光信號。 4.上皮間質轉化（EMT）標志物和炎性體相關蛋白檢測 調節(jié)自噬，Western Blot檢測上皮細胞標志蛋白E-cadherin、間質細胞標志蛋白Vimentin、凋亡相關斑點樣蛋白ASC表達。 結果： 1. BEAS-2B細胞經(jīng)慢性亞砷酸鈉暴露66天，，克隆形成率為22.77%，較對照組（3.06%）具有顯著差異（p0.01）； 2.慢性砷誘導轉化的BEAS-2B細胞，形態(tài)由上皮細胞的不規(guī)則多邊形變?yōu)樗笮�；成功建立各組細胞，獲得pDNA-Beclin1shRNA質粒穩(wěn)定轉染的細胞。 3.急性砷誘導組beclin-1蛋白、LC3Ⅱ蛋白的表達最高，慢性砷誘導組beclin-1蛋白、LC3Ⅱ蛋白的表達較前者下降，但仍然高于對照組；而這兩組細胞自噬降解蛋白P62的表達低于對照組。 4.與對照組相比，急性砷誘導組和慢性砷誘導組MDC染色顯示較強的綠色熒光信號，其中急性砷誘導組熒光信號最強。 5.以雷帕霉素促進自噬，上皮標志蛋白E-cadherin表達增多，而間質標志蛋白vimentin表達下降；而以巴弗洛霉素A1抑制自噬后，結果正相反。 6. IL-1β成熟體與凋亡相關斑點樣蛋白ASC的表達隨著雷帕霉素促進自噬而下降，隨著巴弗洛霉素A1抑制自噬而升高。 結論： 1.慢性亞砷酸鈉誘導的BEAS-2B細胞形態(tài)發(fā)生改變，克隆形成能力增強，細胞發(fā)生轉化； 2.亞砷酸鈉誘導人肺支氣管上皮細胞促進自噬， 3.自噬對ASC與IL-1β具有負調節(jié)作用，自噬對細胞轉化進程起負調節(jié)作用；
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 余思;何曉順;馬毅;胡安斌;巫林偉;朱曉峰;;雷帕霉素轉換在肝移植術后腎功能不全患者中的應用[J];南方醫(yī)科大學學報;2009年11期

2 張可華;宋建國;;EMT與腫瘤[J];生命的化學;2008年05期

本文編號：1245900