本文關(guān)鍵詞：Tn5細(xì)胞中單鏈抗體基因抗人重組質(zhì)粒分子的表達(dá)分析

  更多相關(guān)文章： 表達(dá) 基因 抗人B- 單克隆抗體 細(xì)胞Tn

【摘要】：目的研究Tn5細(xì)胞中單抗抗人重組質(zhì)粒(B7-2)基因的表達(dá)及其活性。方法基于具備信號(hào)肽單抗抗人B7-2構(gòu)建,構(gòu)建系統(tǒng)Bac-to-Bac并含單抗抗人B7-2桿狀重組病毒AcBacmid單抗B7-2,對(duì)Tn5細(xì)胞采用不同感染復(fù)數(shù)(MOI)實(shí)施感染,進(jìn)行24、48、72h不同時(shí)點(diǎn)細(xì)胞蛋白活性的分泌表達(dá),并分析人外周血中單個(gè)核細(xì)胞受Raji刺激呈增殖表達(dá),予以單抗抑制的效果。結(jié)果應(yīng)用不同MOI對(duì)Tn5細(xì)胞感染,達(dá)72h后進(jìn)行細(xì)胞收集,予以聚丙烯酰氨凝膠電泳(PAGE-SDS)分析,其MOI為1~10表達(dá)目的蛋白的量,確定最佳MOI為5;MTT法下自動(dòng)酶標(biāo)儀波長(zhǎng)570nm位置吸光度,其吸光值的大小同細(xì)胞PBMC增殖可呈正相關(guān);各組吸光值顯示細(xì)胞Raji刺激外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)呈增殖表達(dá),單抗抗人B7-2可以抑制Raji細(xì)胞刺激PBMC出現(xiàn)的增殖效應(yīng)。結(jié)論單抗B7-2抗原抗體相結(jié)合的活性,以及對(duì)PBMC產(chǎn)生的抑制效應(yīng)均存在,但未見(jiàn)單抗B7-2效應(yīng)明顯表達(dá),有待進(jìn)行更進(jìn)一步的試驗(yàn)研究。
【作者單位】： 襄陽(yáng)市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：湖北省科技計(jì)劃自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2011CDB298)
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 因?yàn)榧?xì)胞Tn5是能夠使分泌性蛋白表現(xiàn)呈高水平分泌的理想型宿主,同時(shí)昆蟲(chóng)細(xì)胞對(duì)該指標(biāo)表達(dá)的效率也比較顯著,還能夠?qū)腋∨囵B(yǎng)甚至無(wú)血清培養(yǎng)達(dá)到快速適應(yīng),因此AcBacmid重組桿狀病毒單抗人重組質(zhì)粒(B7-2)上清液中能使Tn5細(xì)胞感染[1]。本研究基于具備信號(hào)肽單抗抗人B7-2構(gòu)建,構(gòu)

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 胡靜平;董海輝;邱玉華;陳永井;王文兵;黃光鎂;吳小鋒;朱江;;鼠抗人B7-2分子單鏈抗體基因的構(gòu)建及其在家蠶中的表達(dá)[J];蠶業(yè)科學(xué);2010年02期

2 董海輝;邱玉華;陳永井;胡靜平;黃光鎂;朱江;;抗人B7-2單鏈抗體基因的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的表達(dá)[J];科技通報(bào);2010年03期

3 徐重新;張霄;劉媛;王耘;張存政;劉賢進(jìn);;抗蘇云金芽孢桿菌Cry1B毒蛋白質(zhì)單鏈抗體的篩選與鑒定[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2012年04期

4 黃巍;周麗榮;周婷;孫紅霞;黃曉剛;劉橋;;APPβ分泌酶切割位點(diǎn)特異性單鏈抗體的制備和鑒定[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2012年03期

5 陳昌友;郭靜雅;陳永井;陳明心;孫杰;張彥軍;黃賽男;朱華亭;邱玉華;;抗人CD80單鏈抗體的構(gòu)建、表達(dá)及與抗原結(jié)合的特性分析[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2011年02期

6 周松峰;廖文軍;覃紹敏;袁書(shū)智;白安斌;吳健敏;;抗人紅細(xì)胞單鏈抗體與狂犬病毒G蛋白雙功能融合蛋白的構(gòu)建及生物學(xué)活性檢測(cè)[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2012年06期

7 李天鶴;任桂萍;徐黎明;周兵;郭茉;齊劍英;張宇;趙景壯;于引航;尹杰超;李德山;;抗人IL-1β單鏈抗體的構(gòu)建及其中和活性的檢測(cè)[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2013年03期

8 李小鷗;黃巍;李莉;周麗榮;;封閉N-cadherin解整合素金屬蛋白酶水解位點(diǎn)的單鏈抗體的制備及鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年09期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 徐重新;張霄;張存政;劉媛;謝雅晶;黃鷹;劉賢金;;抗Bt(Cry1B)毒素單鏈抗體在sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)及活性測(cè)定[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2013年05期

2 沈立軍;韓蓮花;朱華亭;孔永;安萌;王婧;夏永潔;邱玉華;;抗人CD80單鏈抗體對(duì)不同腫瘤細(xì)胞膜型CD80分子的識(shí)別與體外增殖的影響[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年10期

3 王志強(qiáng);安萌;朱華亭;孔永;王婧;韓蓮花;夏永潔;邱玉華;;抗人CD86雙價(jià)抗體的表達(dá)及與抗原的結(jié)合特性[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年11期

4 張姣;黃漢昌;姜招峰;;阿爾茨海默病防治中的β-分泌酶抑制機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2013年21期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 安萌;抗人CD86單鏈抗體的研制及生物學(xué)功能研究[D];蘇州大學(xué);2013年

2 王志強(qiáng);抗人CD86雙價(jià)抗體的研制及生物學(xué)活性研究[D];蘇州大學(xué);2013年

3 張留圈;基于磁珠和雙抗夾心免疫分析的Bt Cry1Ac毒素單鏈抗體篩選、鑒定及應(yīng)用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

4 陳繼章;新疆狂犬病病毒流行病學(xué)調(diào)查及基因組和N-G蛋白預(yù)測(cè)分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 尹惠瓊;單鏈抗體的研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2003年02期

2 李澤盛;劉愛(ài)林;譚榮榮;任偉;周向梅;尹曉敏;楊建民;楊利峰;張振山;趙德明;;狂犬病研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2010年07期

3 陳潔;孫中文;;CD80和CD86介導(dǎo)的共刺激信號(hào)的比較及其生物學(xué)作用[J];國(guó)際免疫學(xué)雜志;2006年01期

4 潘家榮;喬艷紅;張維;林敏;張杰;;Bt晶體蛋白Cry1Ac放射免疫檢測(cè)技術(shù)研究[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2006年06期

5 ;Construction of a host range-expanded hybrid baculovirus of BmNPV and AcNPV, and knockout of cysteinase gene for more efficient expression[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2004年05期

6 胡曉林;張春明;;基因工程抗體親和力成熟的策略[J];免疫學(xué)雜志;2006年06期

7 金洪濤;金寧一;李臻;李昌;付延軍;王宏;;鏈重疊PCR構(gòu)建抗HIV免疫毒素及其表達(dá)與鑒定[J];免疫學(xué)雜志;2007年01期

8 邵長(zhǎng)利;史利軍;姚站馨;王宏業(yè);呂茂民;劉明;章金剛;;抗人紅細(xì)胞H抗原單鏈抗體基因克隆和表達(dá)[J];免疫學(xué)雜志;2008年02期

9 周曉梅,沈晉良,高聰芬;兩種轉(zhuǎn)Bt基因棉殺蟲(chóng)蛋白Cry1Ac表達(dá)量的檢測(cè)[J];南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年01期

10 廖文軍;覃紹敏;吳健敏;王仰杰;白安斌;覃建飛;;抗人紅細(xì)胞單鏈抗體(ScFv)-偽狂犬病毒(PRV)gE蛋白雙功能融合蛋白的構(gòu)建及生物學(xué)活性檢測(cè)[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2010年03期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉君;西瓜食酸菌（Acidovorax citrulli）Tn5轉(zhuǎn)座子插入突變體的制備和致病性缺失突變體的鑒定與分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 盧香濃;水稻細(xì)菌性條斑病菌Tn5突變體的表型篩選與突變位點(diǎn)定位[D];廣西大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1232236