本文關(guān)鍵詞：雷帕霉素對UUO大鼠模型腎組織肥大細(xì)胞Tryptase、PAR-2和TGF-β1表達(dá)的影響

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【摘要】：目的：腎間質(zhì)纖維化是各種慢性腎臟疾病發(fā)展到終末期共同的病理改變，其發(fā)生發(fā)展過程中腎小管上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)、肌成纖維細(xì)胞激活等機制，起到了重要作用。纖維化是一個多因子多細(xì)胞參與的復(fù)雜的動態(tài)過程，炎性細(xì)胞及其分泌的各種炎性因子發(fā)揮了重要的作用，尤其是肥大細(xì)胞（mast cell，MC）在其中的作用是不可忽略的。當(dāng)受刺激時，，MC以胞吐方式大量釋放顆粒內(nèi)的物質(zhì)，如類胰蛋白酶（Tryptase，Try）、白三烯、前列腺素、血小板活化因子、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)及多種白細(xì)胞介素(IL)等，這些物質(zhì)能促進(jìn)成纖維細(xì)胞增生、細(xì)胞外基質(zhì)積聚、導(dǎo)致腎組織纖維化。Try是公認(rèn)的肥大細(xì)胞特異性標(biāo)志物，對成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞具有促進(jìn)有絲分裂的作用。Try能增加微血管的通透性，刺激炎癥細(xì)胞移行，促進(jìn)其成熟和細(xì)胞因子釋放。IgA腎病、急慢性間質(zhì)性腎炎時Try可以激活腎小管上皮細(xì)胞PAR-2，從而分泌TGF-β1，使Ⅰ型膠原纖維生成增多，細(xì)胞外基質(zhì)增多。雷帕霉素對肥大細(xì)胞所致的食物過敏反應(yīng)大鼠模型有治療作用，還有研究報道對于肥大細(xì)胞增生癥也有一定的作用。在UUO模型中，肥大細(xì)胞的浸潤是否也起到一定的作用、雷帕霉素對肥大細(xì)胞及其分泌的炎性因子有何影響，還不太明確，因此，我們通過動物模型，進(jìn)行相關(guān)的研究，尋找雷帕霉素治療腎纖維化的另一有力證據(jù)。本課題擬通過建立單側(cè)輸尿管梗阻（unilateralurethral obstruction，UUO）的大鼠腎間質(zhì)纖維化模型，結(jié)合HE染色、Masson染色、免疫組織化學(xué)染色等檢測手段，觀察雷帕霉素對腎間質(zhì)纖維化大鼠腎組織中肥大細(xì)胞Tryptase、PAR-2、TGF-β1表達(dá)的影響，探討雷帕霉素對腎間質(zhì)纖維化的保護(hù)作用，為臨床防治腎間質(zhì)纖維化提供試驗性理論依據(jù)。 方法：選擇清潔級Sprague-Dawley（SD）大鼠54只，雄性，健康，體重(200±20)克，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分為三組：假手術(shù)組(Sham組)、輸尿管結(jié)扎組(UUO組)、雷帕霉素干預(yù)組(Rapa組)，每組各18只。每組又分別于術(shù)后第4、7、14天分批取出梗阻側(cè)腎組織，分別為D4、D7、D14組，每組各6只。UUO組、Rapa組大鼠結(jié)扎左側(cè)輸尿管，Sham組僅游離左側(cè)輸尿管。各組于手術(shù)前1天開始給藥，每天灌胃1次，每周復(fù)查體重，調(diào)整給藥量。Rapa組以雷帕霉素2mg/kg/d灌胃，Sham組及UUO組以等容的生理鹽水灌胃，實驗期間自由進(jìn)食水。各組分別于術(shù)后第4天、7天、14天隨機選取6只大鼠分三批取出梗阻側(cè)腎組織，置于固定液中，包埋、制成切片（1）分別采用蘇木素伊紅(HE)染色、Masson染色觀察各組大鼠腎組織病理變化；（2）采用免疫組織化學(xué)方法測定腎間質(zhì)肥大細(xì)胞特異標(biāo)志物Tryptase、PAR-2、TGF-β1表達(dá)。 結(jié)果應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)IPP(Image-Pro Plus)進(jìn)行半定量分析。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示，各組間比較采用單因素方差分析（滿足正態(tài)性和方差齊性），不滿足正態(tài)性和方差齊性的數(shù)據(jù)資料采用非參數(shù)檢驗，相關(guān)性分析各變量之間的相關(guān)性用Pearson或Spearman檢測。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，以P0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果：光鏡下觀察各組腎臟組織HE染色,UUO組顯示腎小管間質(zhì)中炎癥細(xì)胞增多，小管細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度的變性、萎縮及壞死，小管周圍腎間質(zhì)隨著輸尿管梗阻時間的延長增寬，Rapa組與之相比較，病變程度較輕，Sham組無明顯病變；Masson染色顯示，UUO組腎小管擴(kuò)張逐漸加重，腎間質(zhì)膠原纖維的含量逐漸增加，提示腎間質(zhì)纖維化程度逐漸加重；和UUO組相比，對應(yīng)的Rapa組腎臟組織病理學(xué)變化較輕，Sham組無明顯膠原纖維沉積。 結(jié)合IPP圖像分析系統(tǒng)分析免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：Tryptase、PAR-2、TGF-β1在Sham組各時期均未見明顯的陽性表達(dá)；UUO組和Rapa組中三個因子均于術(shù)后第4天即有表達(dá)，并且隨著梗阻時間表達(dá)逐漸升高；Tryptase主要表達(dá)于腎小球周圍、腎間質(zhì)，PAR-2主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞，TGF-β1主要表現(xiàn)在腎間質(zhì)和腎小管上皮細(xì)胞；在第4、7、14天三組之間的表達(dá)水平比較均為：UUO組Rapa組Sham組（P0.05）。 結(jié)論： （1）UUO大鼠模型中，肥大細(xì)胞的浸潤與腎間質(zhì)纖維化的嚴(yán)重程度有密切關(guān)系，提示肥大細(xì)胞可能參與了腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生； （2）UUO術(shù)后大鼠腎臟Tryptase、PAR-2、TGF-β1表達(dá)逐漸升高；提示肥大細(xì)胞可能通過肥大細(xì)胞-Tryptase-PAR-2-TGF-β1途徑參與腎間質(zhì)纖維化； （3）雷帕霉素干預(yù)后，Tryptase、PAR-2、TGF-β1三者的表達(dá)水平下降，提示雷帕霉素可能通過減少肥大細(xì)胞浸潤，進(jìn)而Tryptase表達(dá)減少，減輕單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎臟間質(zhì)纖維化的程度。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R965;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉雪梅,朱紅艷,甄s

本文編號：1223021