本文關(guān)鍵詞：LIF基因慢病毒載體構(gòu)建及其在人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建LIF慢病毒載體,轉(zhuǎn)染人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,以此獲得高表達(dá)LIF的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,為L(zhǎng)IF在人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)機(jī)制研究中奠定基礎(chǔ)。方法以PCR擴(kuò)增得到LIF基因序列,采用質(zhì)粒重組技術(shù)獲得載有LIF基因的重組質(zhì)粒,然后用重組質(zhì)粒包裝慢病毒。用膠原酶消化法分離培養(yǎng)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,然后將慢病毒轉(zhuǎn)染人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,通過(guò)熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達(dá),采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)慢病毒轉(zhuǎn)染率,RT-PCR及Western blot技術(shù)檢測(cè)LIF的表達(dá)水平,最后經(jīng)SPSS 13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料均以(x±s)表示,組間均數(shù)比較采用成對(duì)樣本t檢驗(yàn),以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增得到LIF基因序列,并且成功構(gòu)建帶有LIF基因的重組質(zhì)粒,重組質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切鑒定,得到大小為608 bp左右的條帶,大小與LIF基因序列匹配,通過(guò)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后獲得慢病毒顆粒,滴度檢測(cè)達(dá)1×108TU/ml。成功分離得到純度高的h ASCs,慢病毒轉(zhuǎn)染h ASCs后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)慢病毒轉(zhuǎn)染率可達(dá)90%。RT-PCR及Western blot結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示,轉(zhuǎn)染后LIF的表達(dá)水平明顯升高。結(jié)論攜帶人LIF基因的慢病毒載體可以有效轉(zhuǎn)染h ASCs,并且表達(dá)LIF。
【作者單位】： 浙江省溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)二科;
【基金】：浙江省自然科學(xué)基金(Y2101091,LY13H090010,LY14H130002) 浙江省高�！笆濉鄙窠�(jīng)生物學(xué)重點(diǎn)學(xué)科(204-071006)
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2;Q78
【正文快照】： 近年來(lái),間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植為神經(jīng)系統(tǒng)疾病如多發(fā)性硬化(Multiplesclerosis,MS)、腦卒中等的治療帶來(lái)了新希望[1]。MSCs是中胚層來(lái)源的具有自我更新和多向分化潛能的多能干細(xì)胞[2]。此外,MSCs還具有低免疫原性和免疫調(diào)節(jié)等特性,MSCs具備的上述特性

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1159273