本文關(guān)鍵詞：外周血早晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞的生物學(xué)特性及鑒定的初步研究

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【摘要】：目的通過人外周血分離培養(yǎng)早晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs),比較兩類EPCs的特性,以期找到可靠的穩(wěn)定生物學(xué)表征及鑒定方法鑒定EPCs。方法通過密度梯度離心法分離人外周血單核細(xì)胞,體外種植于內(nèi)皮細(xì)胞全培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng),分別于培養(yǎng)4~7 d及2~3周獲得早、晚期EPCs。對(duì)兩類EPCs的細(xì)胞形態(tài)、增殖能力、細(xì)胞表型、細(xì)胞因子表達(dá)情況、體外成血管能力及一氧化氮(nitric oxide,NO)釋放能力進(jìn)行檢測(cè)比較,并以成熟人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(human aortic endothelial cells,HAECs)作為陽性對(duì)照。結(jié)果兩類EPCs形態(tài)不同,早期EPCs形成紡錘樣細(xì)胞簇,而晚期EPCs呈鵝卵石樣外觀;晚期EPCs具有高增殖潛能,可在基質(zhì)膠上形成毛細(xì)管狀結(jié)構(gòu),而早期EPCs則不具備該特性;兩類EPCs均可攝取乙�；兔芏戎鞍�,并能與荊豆凝集素Ⅰ結(jié)合;流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)早期EPCs不表達(dá)CD34和CD133,但造血干細(xì)胞標(biāo)記CD14和CD45表達(dá)卻呈陽性,而晚期EPCs對(duì)于內(nèi)皮型表面標(biāo)記CD31和CD34表現(xiàn)為強(qiáng)陽性,但CD14、CD45、CD133表達(dá)則呈陰性。RTPCR分析發(fā)現(xiàn)早期EPCs的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2及血管內(nèi)皮鈣黏蛋白基因的相對(duì)表達(dá)量顯著低于晚期EPCs及HAECs(P0.05),而血管性血友病因子及內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因的相對(duì)表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。細(xì)胞因子分泌方面,早期EPCs培養(yǎng)上清液中的VEGF、粒細(xì)胞集落刺激因子及IL-8濃度明顯高于晚期EPCs(P0.05)。Western blot檢測(cè)示,兩類EPCs均表達(dá)eNOS,但培養(yǎng)5周的晚期EPCs的eNOS表達(dá)水平高于早期EPCs(P0.05);兩種EPCs均可釋放NO,但NO產(chǎn)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 eNOS的表達(dá)及NO釋放能力作為內(nèi)皮細(xì)胞的可靠生物學(xué)特征可用于EPCs鑒別,多方法聯(lián)合方式用于鑒定EPCs更為可行。
【作者單位】： 江蘇省中醫(yī)院血管外科;南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院血管外科;
【基金】：江蘇省干部保健科研項(xiàng)目(BJ14013)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)參與出生后血管發(fā)生是血管生物學(xué)領(lǐng)域的重大研究發(fā)現(xiàn)。EPCs可歸巢至血管新生處參與新生內(nèi)皮化并分化為內(nèi)皮細(xì)胞,其在血管新生、血管修復(fù)、腫瘤病理及組織工程等方面有很大應(yīng)用前景[1-4]。Asahara等[5]于1997年首先在人外周血中

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 Philip V.Peplow;;Growth factor- and cytokine-stimulated endothelial progenitor cells in post-ischemic cerebral neovascularization[J];Neural Regeneration Research;2014年15期

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3 盧輝俊;馮章啟;喬彤;劉晨;顧忠澤;劉長(zhǎng)建;;納米多孔PLLA膜對(duì)晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞行為的影響[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2009年02期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 尹青令;侯寧寧;崔曉棟;張愛華;孫金隆;靖旭;吳海燕;王濟(jì)濰;成敏;;聚乳酸防粘連膜對(duì)晚期內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響[J];功能材料;2014年03期

2 龔曉明;鄭瀾;瞿樹林;;有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠心肌微血管新生能力的影響[J];北京體育大學(xué)學(xué)報(bào);2014年06期

3 劉偉;凌均h，

本文編號(hào)：1145966