本文關(guān)鍵詞：EGFP-Luc-Hepa1-6細(xì)胞系的構(gòu)建及其在小鼠肝癌模型中的應(yīng)用

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【摘要】：目的:構(gòu)建帶有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白EGFP及熒光素酶luciferase的真核表達(dá)載體p CMVLuciferase-IRES2-EGFP,對(duì)肝癌細(xì)胞系Hepa1-6轉(zhuǎn)染后進(jìn)行穩(wěn)定篩選,并將表達(dá)該載體的細(xì)胞系應(yīng)用于小鼠原位肝癌模型構(gòu)建,以對(duì)小鼠肝癌細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定標(biāo)記與活體示蹤。方法:對(duì)p GL3-Basic質(zhì)粒進(jìn)行Xba I酶切、Klenow片段補(bǔ)平黏端、Xho I酶切獲得luciferase小片段,與Xho I/Sma I酶切p IRES2-EGFP質(zhì)粒獲得的載體大片段連接,獲得重組質(zhì)粒p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP。酶切鑒定、測(cè)序比對(duì)確認(rèn)序列完全正確后,以重組載體轉(zhuǎn)染Hepa1-6細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定篩選,以熒光顯微鏡觀察EGFP表達(dá),報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)與LuminaⅡ成像系統(tǒng)檢測(cè)熒光素酶活性。確認(rèn)該細(xì)胞系中的質(zhì)粒得到表達(dá)后,以該細(xì)胞系進(jìn)行C57BL/6小鼠肝臟原位接種構(gòu)建肝癌模型,以LuminaⅡ成像系統(tǒng)連續(xù)活體監(jiān)測(cè)肝癌的生長(zhǎng),取離體的肝癌組織制備石蠟切片(HE染色)和冰凍切片(免疫熒光染色)分別觀察離體腫瘤組織病理學(xué)特征及其中肝癌細(xì)胞綠色熒光蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:成功構(gòu)建表達(dá)p CMV-Luciferase-IRES2-EGFP載體的Hepa1-6細(xì)胞系(EGFP-Luc-Hepa1-6),并以該細(xì)胞系成功構(gòu)建C57BL/6小鼠原位肝癌模型,實(shí)現(xiàn)小鼠肝癌細(xì)胞的活體示蹤與體外標(biāo)記。結(jié)論:成功構(gòu)建EGFP-Luc-Hepa1-6細(xì)胞系,且以此細(xì)胞系構(gòu)建的小鼠原位肝癌模型可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)小鼠肝癌生長(zhǎng)的連續(xù)活體監(jiān)測(cè)與離體組織檢測(cè)。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院;第四軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與發(fā)育生物學(xué)教研室腫瘤生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 肝癌 Hepa- EGFP Luciferase 小鼠 載體
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金重大研究計(jì)劃培育項(xiàng)目(91029731),國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金(81100307),國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金(81401940) 腫瘤生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(第四軍醫(yī)大學(xué))開放基金(Cbskl201408)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R735.7;R-332
【正文快照】： 肝癌的動(dòng)物模型是研究肝癌的發(fā)病機(jī)制、藥物的療效評(píng)價(jià)、開發(fā)新的治療方法的重要工具,已廣泛的應(yīng)用于肝癌的基礎(chǔ)研究中。其構(gòu)建方法可以分為腫瘤移植、基因修飾、病毒感染、化學(xué)試劑誘導(dǎo)等[1]。Schneider等[2]對(duì)2周齡小鼠進(jìn)行腹腔注射二乙基亞硝胺(diethylnitrosamine,DEN),42

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 Sasipawan Machana;Natthida Weerapreeyakul;Sahapat Barusrux;Kanjana Thumanu;Warapom Tanthanuch;;Synergistic anticancer effect of the extracts from Polyalthia evecta caused apoptosis in human hepatoma(HepG2)cells[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2012年08期

2 Sasipawan Machana;Natthida Weerapreeyakul;Sahapat Barusrux;;Anticancer effect of the extracts from Polyalthia evecta against human hepatoma cell line(HepG2)[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2012年05期

3 易永祥;趙偉;韓建波;宋艷;丁瀅;周鎮(zhèn)先;;經(jīng)肝內(nèi)注射腫瘤細(xì)胞建立小鼠肝癌實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷男Ч^察[J];肝膽胰外科雜志;2013年05期

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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3 高愛梅;芹菜素通過抑制Nrf2-ARE通路逆轉(zhuǎn)肝癌耐藥的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

4 周陳杰;二乙基亞硝胺誘發(fā)大鼠原發(fā)性肝癌過程中肝臟膠原的動(dòng)態(tài)觀察[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

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6 萬裴琦;TGF-β1基因多態(tài)性及表達(dá)水平與廣西人群肝癌家族聚集性的相關(guān)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

7 馬守寶;IL-17對(duì)肝細(xì)胞肝癌的促進(jìn)作用及機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

8 高愛梅;芹菜素通過抑制Nrf2-ARE通路逆轉(zhuǎn)肝癌耐藥的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

9 鄧彬;缺氧誘導(dǎo)胃癌調(diào)節(jié)性T細(xì)胞轉(zhuǎn)化及漢黃芩素干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2014年

10 張巍;穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白的肝癌大鼠模型的建立及栓塞對(duì)肝癌肺轉(zhuǎn)移影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

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3 余志宏;SUMO-1基因在DENA誘導(dǎo)大鼠肝癌過程中的表達(dá)變化[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

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5 張振奇;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)腎癌裸鼠皮下移植瘤的影響[D];廈門大學(xué);2014年

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8 宋立瑩;冬蟲夏草提取物對(duì)大鼠慢性肝損傷的保護(hù)作用[D];中南大學(xué);2014年

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 戴紀(jì)剛,閔家新,張國(guó)強(qiáng),吳秋平,周人杰,魏泓;線粒體DNA缺失細(xì)胞系的建立[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年06期

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10 韓嶸,陳偉勝,童英,尚克剛,孟令國(guó);兩個(gè)可進(jìn)入種系的ES細(xì)胞系的建立[J];遺傳學(xué)報(bào);1999年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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3 劉永霞;朱小麗;陳玉華;郭飛;沈默;陳占國(guó);徐威;陳德瑩;陶志華;;雄激素非依賴前列腺癌細(xì)胞系代謝組學(xué)的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 張力;龔明玉;何瑞龍;張立廣;;X-射線對(duì)HepG2細(xì)胞系細(xì)胞周期進(jìn)程的影響[A];第五屆全國(guó)中醫(yī)藥免疫學(xué)術(shù)研討會(huì)——暨環(huán)境·免疫與腫瘤防治綜合交叉會(huì)議論文匯編[C];2009年

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中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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8 楊洋;異常的表觀調(diào)控下調(diào)miR-663促進(jìn)原癌基因H-ras在K562細(xì)胞系的表達(dá)[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：1122245