本文關(guān)鍵詞：粉塵螨抗原免疫治療小鼠結(jié)腸癌的初步研究

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【摘要】：結(jié)腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率居高不下，全球每年有120萬(wàn)例新增結(jié)腸癌患者，目前對(duì)結(jié)腸癌的治療仍然以手術(shù)、放療和化療為主。我們研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌患者中Treg細(xì)胞比例較正常人高，而在過(guò)敏性疾病患者中Treg細(xì)胞比例較正常人低。本研究使用粉塵螨粗蛋白和Der f2重組蛋白用于治療小鼠結(jié)腸癌模型以及對(duì)治療效果進(jìn)行一系列檢測(cè)。 方法：首先制備和鑒定粉塵螨粗蛋白和表達(dá)純化Der f2重組蛋白，摸索建立合適的小鼠結(jié)腸癌模型；制定免疫治療方案后進(jìn)行建模及治療，監(jiān)測(cè)小鼠腫瘤生長(zhǎng)狀況；處死小鼠后，對(duì)小鼠腫瘤進(jìn)行稱重。用流式細(xì)胞的方法檢測(cè)CD8+T細(xì)胞比例及CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例；用熒光定量PCR的方法檢測(cè)Foxp3轉(zhuǎn)錄水平；分別用Western-blot印跡雜交和免疫組化檢測(cè)小鼠腫瘤組織內(nèi)Foxp3蛋白水平。 結(jié)果：摸索和建立了合適的小鼠結(jié)腸癌模型；成功制備和鑒定了粉塵螨粗蛋白以及表達(dá)純化的Der f2重組蛋白，并用于小鼠結(jié)腸癌模型的治療；經(jīng)過(guò)治療后，治療組小鼠腫瘤生長(zhǎng)速度均減緩，其腫瘤重量均低于未治療組；經(jīng)流式細(xì)胞檢測(cè)，治療組小鼠體內(nèi)CD8+T細(xì)胞比例上升，CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例下降，，與未治療組相比，治療組小鼠體內(nèi)Foxp3轉(zhuǎn)錄水平均明顯減低；Western-blot和免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示治療組小鼠腫瘤中Foxp3蛋白水平均降低。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明粉塵螨粗蛋白和Der f2重組蛋白均能有效治療小鼠結(jié)腸癌模型，但其分子機(jī)理有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。用粉塵螨抗原治療結(jié)腸癌有望成為癌癥的免疫治療新方法。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌 粉塵螨 Treg細(xì)胞 Foxp3
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R735.35;R-332
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 第1章 前言8-17
• 1.1 結(jié)腸癌8
• 1.2 調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞8-10
• 1.3 Foxp310
• 1.4 免疫與腫瘤10-11
• 1.5 CD8+T 細(xì)胞與腫瘤11-12
• 1.6 癌癥的免疫治療12-14
• 1.7 粉塵螨與過(guò)敏性哮喘14
• 1.8 過(guò)敏性哮喘中的 Th17/Treg 失衡14-15
• 1.9 本課題研究?jī)?nèi)容與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路15-17
• 第2章 粉塵螨抗原的制備以及小鼠結(jié)腸癌模型的建立17-31
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-21
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備17-18
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)樣品、試劑與耗材18-19
• 2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑配制19-21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 2.2.1 粉塵螨粗蛋白提取21
• 2.2.2 重組粉塵螨 Der f2 蛋白的表達(dá)、純化和復(fù)性21-23
• 2.2.3 WT-CT-26 細(xì)胞培養(yǎng)與 Balb/c 小鼠結(jié)腸癌模型的建立23
• 2.2.4 Balb/c 小鼠結(jié)腸癌腫瘤 HE 染色23-24
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-29
• 2.3.1 粉塵螨粗蛋白提取24-25
• 2.3.2 重組 Der f 2 的表達(dá)和純化25-27
• 2.3.3 Balb/c 小鼠結(jié)腸癌模型的建立與腫瘤組織 HE 染色27-29
• 2.4 討論29-31
• 第3章 粉塵螨抗原免疫治療小鼠結(jié)腸癌模型的初步研究31-52
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料31-34
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物31
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備31-32
• 3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)樣品、試劑與耗材32-33
• 3.1.4 主要試劑配制33-34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法34-41
• 3.2.1 Bal b/c 小鼠結(jié)腸癌模型的建立、分組及免疫治療34-35
• 3.2.2 流式細(xì)胞檢測(cè) CD8+ T 細(xì)胞和 CD4+CD25+FoxP3+Treg 細(xì)胞35-36
• 3.2.3 熒光定量 PCR 檢測(cè) Foxp3 轉(zhuǎn)錄水平36-38
• 3.2.4 免疫組化檢測(cè)腫瘤組織 Foxp3 含量38-39
• 3.2.5 Western-blot 印記檢測(cè) Foxp3 蛋白水平39-41
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-49
• 3.3.1 粉塵螨粗蛋白和 Der f2 重組蛋白治療結(jié)腸癌模型效果評(píng)價(jià)41-43
• 3.3.2 流式細(xì)胞檢測(cè) CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞和 CD8+ T 細(xì)胞43-45
• 3.3.3 熒光定量 RT-PCR 檢測(cè) Foxp3 轉(zhuǎn)錄水平45-46
• 3.3.4 免疫組化檢測(cè)腫瘤組織 Foxp3 水平46-48
• 3.3.5 Western-blot 印記檢測(cè) Foxp3 蛋白水平48-49
• 3.4 討論49-52
• 第4章 結(jié)論與展望52-53
• 4.1 結(jié)論52
• 4.2 進(jìn)一步研究方向52-53
• 致謝53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果59-60
• 綜述60-64
• 參考文獻(xiàn)63-64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 馬佳佳;Nick Lu;陳必良;;轉(zhuǎn)錄因子RORγt對(duì)妊娠期哮喘模型小鼠Th17/Treg平衡的調(diào)節(jié)作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2012年06期

本文編號(hào)：1109637