本文關(guān)鍵詞：支原體MALP-2通過誘導(dǎo)人單核細(xì)胞產(chǎn)生HO-1負(fù)調(diào)控COX-2的表達(dá)

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【摘要】：目的：支原體感染所誘導(dǎo)的過度炎癥反應(yīng)是引起組織損傷的重要因素。在支原體感染的同時，機(jī)體免疫系統(tǒng)可能具備相應(yīng)的自我防御機(jī)制以對抗感染所引起的炎癥失控。本研究旨在探討支原體巨噬細(xì)胞活化脂肽2（macrophage-activatinglipopeptide-2，MALP-2）能否誘導(dǎo)人單核細(xì)胞系THP-1產(chǎn)生血紅素氧合酶-1（Hemeoxygenase， HO-1），，并探討其是否參與負(fù)調(diào)控環(huán)氧化酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）的表達(dá)。 方法：體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，用不同濃度（0、0.01ng/mL、0.1ng/mL、1.0ng/mL和5.0ng/mL）的MALP-2作用16h，或5.0ng/mL MALP-2作用不同時間（0h、4h、8h、12h、16h、24h），Realtime-PCR和Western blot分別檢測HO-1mRNA和蛋白的表達(dá)，比色法分析HO-1酶活性改變情況；同時用不同濃度放線菌素D（actinomycin D，ActD，0.1～10μM）和放線菌酮（cycloheximide，CHX，0.1～10μM）預(yù)處理THP-1細(xì)胞1h，隨后加入5.0ng/mL MALP-2刺激16h，Westernblot檢測HO-1的表達(dá)，以證實HO-1的表達(dá)是否通過轉(zhuǎn)錄和翻譯水平表達(dá)；采用30μM SB203580、PD98059和SP600125預(yù)處理THP-1細(xì)胞30min后加入5.0ng/mL MALP-2共孵育細(xì)胞16h，Western blot檢測HO-1的蛋白表達(dá)情況，以探討HO-1的表達(dá)是否受p38，ERK1/2和JNK的調(diào)控；提取MALP-2處理后的核蛋白及胞漿蛋白，Western blot檢測轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2（NF-E2-relatedfactor2，Nrf2）在細(xì)胞核及胞漿中的表達(dá)情況，并采用siRNA干擾Nrf2表達(dá)，探討HO-1表達(dá)是否受Nrf2調(diào)控；同時觀察MALP-2處理前后THP-1細(xì)胞COX-2表達(dá)情況，并采用siRNA干擾HO-1表達(dá)后，Western blot檢測COX-2蛋白的改變情況，以證實HO-1能否調(diào)控MALP-2誘導(dǎo)COX-2的產(chǎn)生。 結(jié)果： (1)濃度為0、0.01、0.1、1.0、5.0ng/ml的MALP-2誘導(dǎo)人單核細(xì)胞系THP-1細(xì)胞HO-1mRNA和蛋白表達(dá)呈濃度依賴性增加。此外，濃度為0、0.01、0.1、1.0、5.0ng/ml的MALP-2誘導(dǎo)的HO-1酶活性分別為（0.424±0.022）nmol/mg/h、（0.563±0.133）nmol/mg/h、（1.058±0.189）nmol/mg/h、（1.121±0.148）nmol/mg/h、（1.299±0.186）nmol/mg/h； (2)30μM MAPKs特異性抑制劑SB203580、PD98059和SP600125預(yù)處理THP-1細(xì)胞后，加MALP-2處理16h后，與單獨MALP-2組比較，HO-1的表達(dá)量分別抑制了38%、44%和56%，p0.01，具有統(tǒng)計學(xué)意義； (3)5.0ng/mL MALP-2能降低細(xì)胞漿內(nèi)Nrf2的表達(dá)水平，同時增加其細(xì)胞核內(nèi)含量；且轉(zhuǎn)染Nrf2siRNA后，HO-1的表達(dá)下降了40%； (4) MALP-2能以時間依賴性方式誘導(dǎo)COX-2表達(dá)，且轉(zhuǎn)染HO-1siRNA后， COX-2的表達(dá)增高了2.6倍。 結(jié)論： (1) MALP-2誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞HO-1表達(dá)與MAPKs和Nrf2途徑有關(guān)； (2) HO-1可能通過下調(diào)COX-2的高表達(dá)而發(fā)揮對炎癥的負(fù)調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：巨噬細(xì)胞活性脂肽-2 血紅素氧合酶-1 絲裂原活化蛋白激酶 核因子相關(guān)因子-2 環(huán)氧化酶-2
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R375
【目錄】：

• 主要英文縮寫4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-12
• 實驗材料12-14
• 實驗方法14-23
• 實驗結(jié)果23-29
• 討論29-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-39
• 綜述39-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 讀碩期間論文50-51
• 致謝51

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉伯齡;梁s昵

本文編號：1105607