本文關(guān)鍵詞：新型WH1fungin多肽佐劑對乙肝表面抗原免疫原性的影響

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【摘要】：乙肝疫苗的理想佐劑能夠促進(jìn)機(jī)體對乙肝表面抗原產(chǎn)生強(qiáng)烈的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。迄今為止,商業(yè)乙肝疫苗廣為應(yīng)用的是鋁佐劑,但它只能以肌肉注射的方式進(jìn)行免疫,且不能引發(fā)有效的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。WH1fungin是一種從芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)物中分離純化得到的多肽,前期研究表明WH1fungin多肽具有佐劑的活性。本研究將WH1fungin多肽與乙肝表面抗原聯(lián)用以多種方式免疫小鼠,研究其免疫佐劑效果。同時分別對每種免疫方式WH1fungin和抗原的免疫劑量及免疫機(jī)理進(jìn)行了研究,結(jié)果如下：1.WH1fungin多肽及免疫原的免疫劑量研究。皮下注射的方式免疫昆明小鼠,WH1fungin佐劑的免疫劑量為1μg/只/次,乙肝表面抗原的免疫劑量與其效果成正相關(guān)關(guān)系,即在10μg到1μg間,抗原劑量減少,抗體效價逐漸降低。肌肉注射免疫時,乙肝表面抗原的免疫劑量為2μg/只/次時,抗體效價最高,顯著高于1μg和0.5μg劑量組。滴鼻免疫時,WH1fungin佐劑的免疫劑量與免疫效果不成相關(guān)性,在100μg到1μg間,WH1fungin佐劑作用在50μg/只/次時最強(qiáng)；而乙肝表面抗原的免疫劑量與其效果則成正相關(guān)性,劑量降低會顯著減弱其免疫效果。最佳免疫劑量為,皮下注射乙肝表面抗原10μg；肌肉注射乙肝表面抗原2μg；滴鼻免疫WH1fungin佐劑50μg,乙肝表面抗原20μg。2.WH1fungin多肽誘導(dǎo)抗體持續(xù)時間的研究。小鼠血清中抗HBsAg總IgG抗體效價持續(xù)檢測結(jié)果顯示,以皮下注射、肌肉注射、滴鼻這三種方式免疫小鼠時,與陽性對照組相比,WH1fungin佐劑均能長時間誘導(dǎo)抗HBsAg總IgG抗體的持續(xù)表達(dá)。3.特異性IgG抗體亞型的檢測。小鼠血清中特異性IgG抗體亞型分析顯示,以皮下注射和肌肉注射的方式免疫小鼠時,WH1fungin佐劑組的IgGl和IgG2a均高于鋁佐劑組,但WH1fungin佐劑組IgG的提高以IgG1亞型增加為主。以滴鼻的方式免疫小鼠時,WH1fungin佐劑組IgGl抗體效價明顯高于CpG佐劑組,但CpG佐劑組IgG2a抗體效價高于WH1fungin佐劑組抗體效價。結(jié)果表明,以皮下注射、肌肉注射、滴鼻這三種方式免疫小鼠時,WH1fungin多肽偏向于誘導(dǎo)以Th2型為主的混合型Th1/Th2型體液免疫應(yīng)答。4.T淋巴細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測。流式細(xì)胞儀檢測CD4+、CD8+ T細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的細(xì)胞因子TNF-α和IFN-γ。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,皮下注射、肌肉注射和滴鼻免疫時,WH1fungin多肽均能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答,且肌肉免疫時,WH1fungin多肽能顯著增強(qiáng)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的殺傷活性。5.細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞殺傷活性的檢測。肌肉免疫和鼻腔免疫時,WH1fungin均能夠增強(qiáng)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的殺傷活性,肌肉免疫時效果更為顯著,但皮下免疫時未檢測到WH1fungin佐劑組細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的殺傷活性。6.抗原特異性淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)。MTT法檢測特異性淋巴細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,以肌肉注射、鼻腔免疫這兩種方式免疫小鼠時,在HBsAg刺激下,WH1fungin多肽促進(jìn)特異性淋巴細(xì)胞增殖的效果極顯著；皮下注射時,WH1fungin多肽促進(jìn)特異性淋巴細(xì)胞增殖的效果顯著。7.肺泡及小腸中IgA的檢測。鼻腔免疫時,在WH1fungin佐劑組小鼠肺泡灌洗液和小腸灌洗液中均檢測到特異性IgA抗體,這表明WH1fungin能夠誘導(dǎo)粘膜免疫應(yīng)答。綜上所述,WH1fungin多肽作為一種新型佐劑與乙肝表面抗原聯(lián)用時,可通過皮下注射、肌肉注射、滴鼻三種方式進(jìn)行免疫,其中肌肉注射免疫能夠顯著提高體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答,鼻腔免疫可誘發(fā)有效的粘膜免疫應(yīng)答,同時也能夠誘導(dǎo)Th2型體液免疫為主的Th1/Th2混合型系統(tǒng)免疫應(yīng)答。
【關(guān)鍵詞】：WH1fungin多肽 乙肝表面抗原 免疫方式 免疫應(yīng)答
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 縮略語表11-13
• 1 前言13-25
• 1.1 佐劑13
• 1.2 佐劑的作用機(jī)制13-14
• 1.3 常見的佐劑14-17
• 1.3.1 弗氏佐劑14
• 1.3.2 鋁佐劑14-15
• 1.3.3 脂質(zhì)體15
• 1.3.4 皂角苷15-16
• 1.3.5 粘膜免疫佐劑16-17
• 1.4 乙肝疫苗17-23
• 1.4.1 乙肝疫苗的研究現(xiàn)狀17
• 1.4.2 肌注乙肝疫苗17-20
• 1.4.3 粘膜免疫乙肝疫苗20-23
• 1.4.3.1 粘膜免疫乙肝疫苗的應(yīng)用前景20
• 1.4.3.2 口服乙肝疫苗20-22
• 1.4.3.3 鼻腔免疫乙肝疫苗22-23
• 1.5 環(huán)肽的研究現(xiàn)狀23-24
• 1.5.1 環(huán)肽的概述23
• 1.5.2 環(huán)肽的功能23-24
• 1.6 研究目的與意義24-25
• 2 材料與方法25-35
• 2.1 材料25-28
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及試劑25
• 2.1.2 主要試劑和儀器25-27
• 2.1.3 溶液配制27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-35
• 2.2.1 WH1fungin佐劑皮下免疫效果研究28-31
• 2.2.2 WH1fungin佐劑肌肉免疫效果研究31-32
• 2.2.3 WH1fungin佐劑鼻腔免疫效果研究32-35
• 3 結(jié)果與分析35-51
• 3.1 皮下注射免疫應(yīng)答35-39
• 3.1.1 HBsAg皮下注射免疫的劑量效應(yīng)35
• 3.1.2 血清抗原特異性IgG抗體效價的持續(xù)時間35-36
• 3.1.3 皮下免疫誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG抗體亞型36-37
• 3.1.4 T淋巴細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測37-38
• 3.1.5 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的殺傷活性38
• 3.1.6 抗原特異性淋巴細(xì)胞的增殖38-39
• 3.2 肌肉注射免疫佐劑激發(fā)免疫應(yīng)答效果的檢測39-44
• 3.2.1 HBsAg肌肉注射免疫的劑量效應(yīng)39-40
• 3.2.2 血清抗原特異性IgG抗體效價的持續(xù)時間40
• 3.2.3 肌肉免疫誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG抗體亞型40-41
• 3.2.4 T淋巴細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測41-42
• 3.2.5 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的殺傷活性42-43
• 3.2.6 抗原特異性淋巴細(xì)胞的增殖43-44
• 3.3 鼻腔免疫激發(fā)的免疫應(yīng)答44-51
• 3.3.1 HBsAg鼻腔免疫的劑量效應(yīng)44
• 3.3.2 WH1fungin鼻腔免疫的劑量效應(yīng)44-45
• 3.3.3 血清抗原特異性IgG抗體效價的持續(xù)時間45-46
• 3.3.4 鼻腔免疫誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG抗體亞型46
• 3.3.5 T淋巴細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測46-48
• 3.3.6 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的殺傷活性48
• 3.3.7 抗原特異性淋巴細(xì)胞的增殖48-49
• 3.3.8 肺泡灌洗液中的IgA49-50
• 3.3.9 小腸灌洗液中的IgA50-51
• 4 討論51-54
• 參考文獻(xiàn)54-63
• 致謝63-64
• 附錄64

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本文編號：1093558