本文關(guān)鍵詞：重組單增李斯特菌溶血素O在HEK293T細(xì)胞中的分泌表達(dá)及活性分析

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【摘要】：為研究單增李斯特菌分泌的溶血素O(LLO)的免疫佐劑作用,需要構(gòu)建其真核表達(dá)載體,使其在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行分泌表達(dá),從而發(fā)揮其生物佐劑活性。為此,本試驗(yàn)通過(guò)PCR方法從LM基因組DNA中擴(kuò)增了LLO基因,并將其插入到帶有CD5信號(hào)肽的質(zhì)粒pcDNA3.1ACD5sp的信號(hào)肽下游構(gòu)建成真核表達(dá)載體,然后轉(zhuǎn)染人胚腎細(xì)胞HEK293T細(xì)胞使其分泌表達(dá),用Ni-NTA瓊脂糖凝膠層析法從培養(yǎng)基中分離純化重組LLO蛋白,通過(guò)Western-blot對(duì)其進(jìn)行鑒定,并用溶血試驗(yàn)鑒定其生物活性。結(jié)果表明,擴(kuò)增的LLO基因序列與GenBank中的基因序列完全一致,在HEK293T細(xì)胞中表達(dá)的重組LLO在CD5信號(hào)肽介導(dǎo)下能被分泌到細(xì)胞外,并具有較強(qiáng)的溶血活性,這為進(jìn)一步研究LLO的功能提供了必要的條件。
【作者單位】： 中國(guó)人民解放軍保定第252醫(yī)院檢驗(yàn)科;河北大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院/河北省獸用生物制品工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 單增李斯特菌 溶血素O 真核表達(dá) 溶血活性
【基金】：河北省自然科學(xué)基金(C2013204130) 河北大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)科專項(xiàng)資金建設(shè)項(xiàng)目(2015A2002)
【分類號(hào)】：R378;S852.61
【正文快照】： 單增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一種重要的食源性人獸共患病原菌,可引發(fā)人的腦膜炎、發(fā)熱性敗血性胃腸炎、孕婦母嬰和圍產(chǎn)期感染等疾病的發(fā)生[1-4],直接威脅著人類和動(dòng)物的健康。研究表明,在LM的感染過(guò)程中其毒力因子李斯特菌溶血素O(Listeriolysin O,LLO)發(fā)揮著

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