本文關鍵詞：聚凝胺增強Ror2重組腺病毒感染K562細胞效應的研究

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【摘要】：目的探索應用聚凝胺(polybrene)試劑增強Ror2重組腺病毒對K562細胞轉染效率的技術。方法在K562細胞中分別加入0~12μl Ror2重組腺病毒,摸索最佳重組腺病毒用量;同時加入0~5μg/ml polybrene和最佳重組腺病毒用量,培養(yǎng)1~3d后,在熒光顯微鏡下計數,對比加入polybrene前后被感染的細胞數。臺盼藍染色觀察重組腺病毒引起K562細胞死亡的情況。采用RT-PCR和Western blotting檢測Ror2基因的表達情況。結果 Polybrene濃度為3μg/ml和重組腺病毒8μl時,感染效果最佳,對細胞生長影響較小,實驗組感染效果是對照組的17倍;加入polybrene后,外源性Ror2m RNA和蛋白表達水平均明顯增高。結論 Polybrene能顯著增強重組腺病毒感染K562細胞的作用,并能高效表達外源性Ror2基因,該法簡便、價廉、有效,是血液疾病分子生物學研究的一個良好策略。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院臨床血液學教研室;
【關鍵詞】： 聚凝胺 腺病毒科 K細胞 基因 ror
【基金】：國家自然科學基金面上項目(81370624)~~
【分類號】：R373
【正文快照】： 入效率高,被廣泛采用。生物學方法通常采用病毒作為基因載體,如反轉錄病毒、慢病毒和腺病毒載體。慢病毒和反轉錄病毒導入的基因可整合到細胞的基因組序列中,所以有潛在致病風險,且導入細胞的拷貝數不高,基因表達變化不明顯,且不易感染終末期或增殖慢的細胞,制備也相對煩瑣。

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