本文關(guān)鍵詞：蛋白磷酸酶2Ac介導(dǎo)Smad3中間連接區(qū)去磷酸化促腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的研究

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【摘要】：目的:通過(guò)蛋白磷酸酶2Ac(PP2Ac)過(guò)表達(dá)和小干擾RNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2細(xì)胞)后予以轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)刺激,觀(guān)察PP2Ac對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)合成、腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(EMT)和Smad3中間連接區(qū)磷酸化的影響,探討PP2Ac促腎間質(zhì)纖維化的機(jī)制。方法:常規(guī)培養(yǎng)HK-2細(xì)胞,分為對(duì)照組、TGF-β1組和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染+TGF-β1組。采用RT-PCR和Western Blot法檢測(cè)PP2Ac、纖維連接蛋白(FN)、Ⅰ型膠原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和E選擇素(E-cadherin)表達(dá)水平。采用Western blot法檢測(cè)Smad3、Smad3中間連接區(qū)p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)表達(dá)情況。結(jié)果:RT-PCR和Western Blot結(jié)果均顯示:PP2Ac過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞再予TGF-β1刺激24h后,PP2Ac表達(dá)較TGF-β1組升高,同時(shí)FN、Col-Ⅰ和a-SMA表達(dá)明顯上調(diào),E-cadherin表達(dá)下調(diào);而PP2Ac小干擾RNA轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞后再予TGF-β1刺激24h,較TGF-β1組,PP2Ac表達(dá)降低,FN、Col-Ⅰ和α-SMA表達(dá)減少,E-cadherin表達(dá)增高(P0.05)。Western Blot結(jié)果顯示:TGF-β1刺激HK-2細(xì)胞1h時(shí)PP2Ac和Smad3中間區(qū)磷酸化的蛋白表達(dá)均達(dá)到峰值;HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染PP2Ac過(guò)表達(dá)質(zhì)粒再予TGF-β1刺激1h后,與單純TGF-β1刺激組比較,核蛋白中p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)表達(dá)均下降;而PP2Ac小干擾RNA轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞再予TGF-β1刺激1h后,核蛋白中p Smad3-L(p Ser204)和p Smad3-L(p Ser208)蛋白表達(dá)均增加(P0.05)。結(jié)論:PP2Ac促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞外基質(zhì)的生成及EMT;PP2Ac介導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞Smad3中間連接區(qū)去磷酸化。
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院腎內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 蛋白磷酸酶Ac 去磷酸化 細(xì)胞外基質(zhì)合成 EMT Smad中間連接區(qū)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81100486;81370792) 湖南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2013SK3036) 中華醫(yī)學(xué)會(huì)臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)項(xiàng)資金(13030400425)
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)被認(rèn)為是調(diào)節(jié)腎小管間質(zhì)纖維化最重要的因子之一[1],其主要通過(guò)TGF-β/Smad經(jīng)典信號(hào)通路調(diào)控腎間質(zhì)纖維化,而Smad3被認(rèn)為是介導(dǎo)TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)鍵因子[2]。Smad3蛋白c末端磷酸化可正向調(diào)控TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。然而,新近研究發(fā)現(xiàn),曾認(rèn)為無(wú)特殊功能的Sm

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1050037