本文關(guān)鍵詞：惡性瘧原蟲標準株的建立

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【摘要】：目的：(1)本課題擬對惡性瘧原蟲野外蟲株進行體外培養(yǎng)馴化,以期為建立惡性瘧原蟲標準蟲株提供實驗材料。(2)篩選惡性瘧原蟲鑒定指標,初步建立惡性瘧原蟲生物特性評價方法。(3)為惡性瘧原蟲云南省地方標準株的申報做好工作累積和前期準備。 研究方法：(1)本次試驗主要的方法是在Trager和Jensen體外培養(yǎng)法的基礎(chǔ)上發(fā)展而來。對不同凍存方法的惡性瘧原蟲采用體外連續(xù)培養(yǎng)方法,通過建立不同的體外連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng),獲得惡性瘧原蟲體外生長特性。(2)采用體外微量法對馴化培養(yǎng)惡性瘧原蟲的氯喹、雙氫青蒿素、萘酚喹、哌喹敏感性進行測定,并在ICE introduction軟件分析數(shù)據(jù),計算各種抗瘧藥的原蟲體外抑制率、ICso、IC90和IC99及其95%可信限。 結(jié)果：(1)分離于中緬邊境地區(qū)的F09M/01和F09M/23惡性瘧原蟲株,通過持續(xù)培養(yǎng)10個月、傳代20代、凍融復(fù)蘇2次,已適應(yīng)體外連續(xù)培養(yǎng)和液氮凍存,已凍存F09M/0l惡性瘧原蟲實驗株10ml(50%混懸液)。(2)F09M/23蟲株對氯喹的IC50表達值為1.83pmol/L, IC90表達值為31.02pmol/L, IC99表達值為678.96pmol/L,95%CI為0.84～2.83pmol/L;對萘酚喹的ICso表達值為0.29pmol/L, IC90表達值為25.05pmol/L, IC99表達值為3248.82pmol/L,95%CI為0.18-0.4pmol/;對哌喹的IC50表達值為19.16pmol/L, IC90表達值為256.47pmol/L,IC99表達值為4351.76pmol/L,95%CI為14.2-24.0pmol/L,對雙氫青蒿素的IC50表達值為0.78nmol/L, IC90表達值為7.58nmol/L, IC99表達值為91nmol/L,95%CI表達值為0.53-1.02nmol/L,即F09M/23蟲株對氯喹、哌喹、雙氫青蒿素敏感。 結(jié)論：(1)采用灌注混合氣體Trager改良型蠟燭缸體外培養(yǎng)法對F09M/01、F09M/23兩株惡性瘧原蟲野生蟲株進行體外馴化,通過持續(xù)培養(yǎng)10個月、傳代20代、凍融復(fù)蘇2次,證實兩株惡性瘧原蟲已適應(yīng)體外連續(xù)培養(yǎng)和液氮凍存,可作為實驗蟲株加以利用。F09M/01、F09M/23兩株惡性瘧原蟲蟲株在體外馴化初期密度上升較慢,持續(xù)時期為1w左右,之后原蟲密度可持續(xù)增加,至12w時原蟲密度上升再次出現(xiàn)約48h的暫緩。兩株惡性瘧原蟲蟲株的最適培養(yǎng)溫度為37.2℃,換液頻率為1次/24h,傳代頻率為1次/3～4d。(2)惡性瘧原蟲體外連續(xù)生長特性、對抗瘧藥物的敏感性是科學(xué)鑒定惡性瘧原蟲的主要指標。(3)分離于中緬邊境地區(qū)、已馴化成功的F09M/23惡性瘧原蟲株是氯喹、哌喹、雙氫青蒿素敏感性實驗室蟲株。
【關(guān)鍵詞】：惡性瘧原蟲 培養(yǎng) 藥物敏感性 標準 蟲株
【學(xué)位授予單位】：大理學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R382.31
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-7
• 前言7-8
• 材料與方法8-16
• 1. 試驗材料8-9
• 1.1 主要試驗器材8-9
• 1.2 主要試劑與耗材9
• 2. 實驗方法9-16
• 2.1 常用試劑和培養(yǎng)基配制9-11
• 2.2 復(fù)蘇及體外連續(xù)培養(yǎng)惡性瘧原蟲11-12
• 2.3 凍存惡性瘧原蟲12-13
• 2.4 同步化13
• 2.5 抗瘧藥敏感性體外測定板制作13-14
• 2.6 體外微量法測定惡性瘧原蟲對藥物敏感性14-15
• 2.7 名詞解釋15
• 2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計15-16
• 結(jié)果16-26
• 1. 野生蟲株來源16
• 2. 體外連續(xù)培養(yǎng)16-26
• 2.1 形態(tài)17-19
• 2.2 生長曲線19-20
• 2.3 F09M/23蟲株同步化曲線20-21
• 2.4 抗瘧藥敏感性21-26
• 討論26-31
• 1. 惡性瘧原蟲馴化、培養(yǎng)26-29
• 1.1 培養(yǎng)基26
• 1.2 血清及血漿26-27
• 1.3 紅細胞27
• 1.4 培養(yǎng)物內(nèi)環(huán)境27-28
• 1.5 瘧原蟲體外培養(yǎng)污染控制28
• 1.6 常見的同步化方法28-29
• 2. 惡性瘧原蟲生物活性鑒定29-30
• 2.1 生長特性29-30
• 2.2 抗瘧藥敏感性測定30
• 3. 云南省地方標準蟲株的建立30-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-35
• 附件一35-40
• 附件二40-41
• 致謝41

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 楊樹桐,潘衛(wèi)慶,鄧海琳,陸德如;惡性瘧原蟲FCC1/HN株MSA1抗原部分保守區(qū)基因的序列測定[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1993年01期

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本文編號：1031927