本文關鍵詞：H7N9流感病毒血凝素HA在畢赤酵母中的表達及免疫原性分析

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【摘要】：目的利用畢赤酵母表達制備H7N9流感病毒血凝素[HA 1~525個氨基酸(aa)],并對其免疫原性進行研究。方法經(jīng)全基因合成獲得H7N9流感病毒[A/Hangzhou/1/2013(H7N9)]全長HA,以其為模板,PCR得到片段HA1-525,通過NspⅤ和NotⅠ雙酶切連入p PICZαA載體,轉(zhuǎn)入畢赤酵母X33,ELISA篩選陽性克隆。發(fā)酵培養(yǎng)后,表達上清經(jīng)PEG20000沉淀獲取HA1-525,并用糖苷內(nèi)切酶H(endo H)酶切分析其N-糖鏈。將制備的HA1-525免疫BALB/c小鼠,經(jīng)ELISA檢測特異性HA7抗體滴度,紅細胞凝集抑制實驗分析血抑活性。結(jié)果培養(yǎng)上清用抗HA7抗體經(jīng)ELISA檢測,重組菌成功表達HA7,且Western印跡檢測發(fā)現(xiàn)有特異性彌散條帶,經(jīng)endo H酶切后,HA1-525為均一條帶,相對分子質(zhì)量約58×103,與理論大小相當,表明HA1-525存在甘露糖基化結(jié)構。HA1-525兩次免疫小鼠后可產(chǎn)生1∶36 000的抗體滴度。以H7N9裂解苗為抗原,檢測其血抑活性為1∶700。結(jié)論利用畢赤酵母表達的H7N9流感病毒HA1-525可以誘導小鼠產(chǎn)生針對HA7的中和抗體。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所;沈陽藥科大學生命科學與生物制藥學院;
【關鍵詞】： HN流感病毒 血凝素類 畢赤酵母 紅細胞凝集抑制
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31200082) 北京市自然科學基金資助項目(7152112)
【分類號】：R373
【正文快照】： 近年來,流感病毒引起的疫情暴發(fā)越來越頻繁,如2003年的H5N1、2009年的H1N1,以及2013年的H7N9等均造成一定數(shù)量的死亡案例。而預防接種是預防流感暴發(fā)的主要有效手段。傳統(tǒng)的流感疫苗是在雞胚中擴增流感病毒,再經(jīng)過滅活或裂解等方法生產(chǎn),其主要抗原為流感病毒的血凝素(hemag-gl

【共引文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：1019309