本文關鍵詞：吡喹酮新衍生物抗日本血吸蟲生物學效應研究

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【摘要】：第一部分吡喹酮(PZQ)衍生物和PZQ消旋體體外抗日本血吸蟲生物學效應 目的：觀察17種DW系列及32種YCH-II-P系列PZQ衍生物和2種PZQ消 旋體對體外培養(yǎng)的日本血吸蟲成蟲和童蟲活性的影響。 方法：ICR小鼠感染日本血吸蟲尾蚴后第17d及第6w肝門靜脈灌注法分別收集童蟲與成蟲，加入不同濃度的化合物于DMEM培養(yǎng)液中，過夜后(16h)無菌生理鹽水洗滌蟲體3次，換無藥物的新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)蟲體72h,每天置于體視顯微鏡下觀察其死亡率及活力降低情況，收集第72h蟲體作掃描電鏡觀察。 結果：經觀察17種DW系列對PZQ衍生物日本血吸蟲均有一定的殺蟲效應，其中以DW-3-15殺蟲效應最強，作用濃度為50μmol L時蟲體完全死亡，體外抗日本血吸蟲成蟲及童蟲臨界致死濃度分別為15μmol L及10μmol L。32種YCH-II-P系列PZQ衍生物篩選出P96、P125、P126、P64種有效化合物。其中P96作用濃度為50μmol L時蟲體完全死亡，體外抗日本血吸蟲成蟲及童蟲臨界致死濃度均為25μmol L，掃描電鏡（SEM）顯示蟲體皮層及抱雌溝內壁損傷嚴重。2種PZQ消旋體中R-PZQ作用濃度為100μmol L時成蟲及童蟲均完全死亡。SEM顯示蟲體皮層及抱雌溝內壁僅有輕度損傷。 結論: DW系列衍生物體外具有一定的殺日本血吸蟲作用，其中以DW-3-15殺蟲效應最強。YCH-II-P系列衍生物中P96體外具有顯著的殺日本血吸蟲成蟲和童蟲作用效應，兩種PZQ消旋體中R-PZQ具有顯著的殺日本血吸蟲成蟲作用。 第二部分PZQ衍生物P96體內抗日本血吸蟲效應 目的：觀察PZQ衍生物P96對感染小鼠體內不同發(fā)育階段蟲體殺蟲效應及體內殺蟲劑量依賴效應。 方法：小鼠感染日本血吸蟲尾蚴后，在蟲體發(fā)育的不同階段（1d，3d，7d，14d，21d，28d）以200mg/kg/只的劑量及在感染后第14天以不同劑量經灌胃連續(xù)給藥5d，停藥后21d解剖小鼠計算減蟲率。進一步于成蟲期（28d）經灌胃連續(xù)給藥5d殺蟲，分別于停藥后第1d，3d，7d取蟲，SEM觀察P96對體內蟲體的損傷作用。 結果：成蟲期與童蟲期經PZQ衍生物P96作用后檢獲蟲數與對照組相比，顯著減少（P0.05）。其中成蟲期（28d）P96組減蟲率(53.6%)與PZQ組(67.1%)相近（P0.05），童蟲期（14d）P96組減蟲率（58.2%）顯著高于PZQ組（19.9%，P0.05），尤其在童蟲期1d、3d、7d、14d、21d的減蟲率為43.5%~58.2%，均顯著高于PZQ組（5.9%~45.0%，P0.05）。P96對體內成蟲用藥后1d、3d、7d SEM觀察顯示蟲體皮層及抱雌溝內壁嚴重受損 結論：PZQ衍生物P96體內具有顯著抗日本血吸蟲成蟲與童蟲的作用，其體內抗日本血吸蟲成蟲作用與PZQ相仿，體內抗日本血吸蟲童蟲作用則明顯優(yōu)于PZQ，并存在明顯的劑量依賴效應 第三部分鈣通道阻滯劑與肌動蛋白解聚劑對P96體外抗日本血吸蟲效應的影響 目的：通過觀察鈣通道阻滯劑(calcium channel blockers，CCBs)與細胞松弛素-D(cytochalasin D，CyD)對P96體外抗日本血吸蟲活性的拮抗作用，探討PZQ衍生物對血吸蟲的藥物作用靶點及其機制。 方法：在單性日本血吸蟲尾蚴感染小鼠6w后，將采用肝門靜脈灌注法收集雄性成蟲分別與CCBs及CyD預孵育lh，然后加入臨界致死濃度的P96與蟲體孵育過夜(16h)，，次日用無菌生理鹽水洗滌蟲體3次，換至新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)蟲體72h，每天置于體視顯微鏡下觀察并記錄蟲體活力，收集第72h蟲體作SEM觀察。 結果：鈣通道阻滯劑尼非地平和尼群地平及CyD對P96抗日本血吸蟲的拮抗效應均較弱， CCBs或CyD預孵育對P96的抗蟲作用基本無影響。 結論：鈣通道阻滯劑尼非地平和CyD可特異性地抑制肌動蛋白與微絲有關的細胞骨架，干擾細胞膜離子通道（如Ca~(2+)通道）的一些相關功能，可拮抗PZQ的殺蟲效應。本實驗結果表明，CCBs和CyD無明顯拮抗P96抗血吸蟲效應，提示P96的對血吸蟲的藥物作用靶點及其機制可能與PZQ不同，其殺蟲效應與細胞Ca~(2+)內穩(wěn)態(tài)的變化相關性較小。
【關鍵詞】：日本血吸蟲 PZQ衍生物 鈣通道阻滯劑 細胞松弛素-D
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R965;R383.24
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 研究背景11-15
• 參考文獻13-15
• 第一部分 DW 系列及 YCH-II-P 系列吡喹酮(PZQ) 衍生物和 PZQ 消旋體體外抗日本血吸蟲生物學效應15-32
• 材料與方法15-19
• 結果19-28
• 討論28-30
• 參考文獻30-32
• 第二部分 PZQ衍生物 P96 體內抗日本血吸蟲效應32-41
• 材料與方法32-33
• 結果33-37
• 討論37-39
• 參考文獻39-41
• 第三部分 鈣通道阻滯劑與肌動蛋白解聚劑對 P96 體外抗日本血吸蟲效應的影響41-50
• 材料與方法41-42
• 結果42-45
• 討論45-47
• 參考文獻47-50
• 全文小結50-51
• 附錄一 縮寫詞表51-52
• 附錄二 主要儀器與設備52-53
• 綜述53-63
• 參考文獻58-63
• 攻讀學位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文63-64
• 致謝64-65

【參考文獻】

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本文編號：1015106