本文關(guān)鍵詞：AMPK在線粒體中的分布及線粒體中AMPKα1對細胞自噬的影響

  更多相關(guān)文章： AMPK 線粒體 亞細胞定位 自噬

【摘要】：背景和目的： 5’單磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）是細胞的能量感受器，調(diào)節(jié)細胞能量代謝，在正常細胞和癌細胞中均發(fā)揮重要的生物功能，它的激活有助于糾正代謝紊亂，使其代謝趨向生理平衡。在細胞應(yīng)急反應(yīng)中，細胞感受到能量危機, ATP濃度下降，AMP濃度上升，細胞內(nèi)AMP/ATP比例上升，AMPK被激活；在病理狀態(tài)下，如代謝綜合征、腫瘤等，常伴隨能量代謝失調(diào)，AMPK活性下降，此時，藥物激活A(yù)MPK可以使能量代謝恢復(fù)正常。因此，，AMPK被視為治療代謝性疾病與腫瘤的作用靶點。線粒體作為細胞的能量工廠，參與人體眾多生理與病理過程，而AMPK對能量代謝的調(diào)節(jié)與線粒體的功能密不可分。越來越多研究表明，線粒體能影響AMPK的活性，同時AMPK也通過多方面對線粒體進行調(diào)節(jié)。但AMPK能否通過直接結(jié)合在細胞線粒體內(nèi)而發(fā)揮調(diào)節(jié)細胞功能，目前尚無報道。本研究旨在解決這一問題并探明某些特定的功能是否歸因于線粒體AMPK。 方法: 1. AMPK在線粒體的定位。采用免疫印跡和免疫熒技術(shù)檢測AMPK在線粒體的定位。為檢測AMPK定位于線粒體的決定片段，我們使HEK-293T細胞內(nèi)表達AMPKα1亞基各片段，采用生化方法檢測各片段是否定位于線粒體內(nèi)。 2.線粒體中AMPK的功能。為此目的，設(shè)計以慢病毒為載體，含有持續(xù)激活的AMPKα1亞基的重組病毒，且在該持續(xù)激活的亞基上連接靶向線粒體的肽段且在亞基氨基酸末端連接Flag抗原決定簇；將該重組病毒轉(zhuǎn)染于肺癌細胞系-A549細胞中。隨后研究線粒體AMPK對自噬的影響。 結(jié)果： 1.內(nèi)源性AMPK包括α亞基和β亞基不僅分布于其它亞細胞結(jié)構(gòu)，也分布在線粒體上。 2. AMPKα1與線粒體的結(jié)合位點在其羧基末端的392-548氨基酸殘基之間，該結(jié)合位點與亞基上的β亞基結(jié)合位點相重疊，由此表明α1亞基直接結(jié)合或者通過β亞基間接結(jié)合到線粒體上。 3.線粒體靶向募集活性AMPK可以在無糖條件下增強自噬，表明線粒體AMPK在自噬中發(fā)揮重要作用。 結(jié)論： 1. AMPK存在于線粒體內(nèi)且AMPKα1定位于線粒體的決定片段為其羧基末端：391-548氨基酸序列； 2. AMPK在線粒體內(nèi)對自噬發(fā)揮重要作用，表明在無糖時保護細胞；
【關(guān)鍵詞】：AMPK 線粒體 亞細胞定位 自噬
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 材料與方法14-26
• 2.1 材料14-17
• 2.1.1 實驗材料14
• 2.1.2. 主要試劑14-16
• 2.1.3 主要儀器16-17
• 2.2 方法17-25
• 2.2.1 主要溶液的配制17-19
• 2.2.2 實驗方法19-25
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)處理25-26
• 第3章 結(jié)果26-32
• 3.1 AMPKβ在 A549 和 293AD 細胞中的分布26
• 3.2 免疫印跡法檢測 AMPK 在 SD 大鼠及 A549 細胞線粒體內(nèi)的分布26-27
• 3.3 AMPKα1 的線粒體結(jié)合片段27-28
• 3.4 線粒體上的 AMPKα1 對 A549 細胞自噬的影響28-32
• 第4章 討論32-35
• 4.1 AMPK 在線粒體內(nèi)的定位32-33
• 4.2 線粒體中 AMPK 對細胞自噬的影響33-35
• 第5章 結(jié)論35-36
• 致謝36-37
• 參考文獻37-40
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果40-41
• 綜述41-57
• 參考文獻53-57

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐靜;劉毅;完強;賈振華;王榮;;高糖環(huán)境對大鼠腎小球系膜細胞AMPK表達及活性的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年05期

2 宮克城;丁樹哲;;AMPK與2型糖尿病的關(guān)系及其在運動介導(dǎo)下的研究[J];遼寧體育科技;2009年03期

3 黃德強;羅凌玉;王麗麗;羅時文;呂農(nóng)華;羅志軍;;AMPK在胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的作用[J];中國細胞生物學(xué)學(xué)報;2011年11期

4 李爽;李燕舞;王蕾;阿拉木斯;林艷;;長期運動訓(xùn)練對機體血清中AMPK水平的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2012年24期

5 楊子初;廖q伶;;AMPK在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中的意義與展望[J];中國細胞生物學(xué)學(xué)報;2013年03期

6 蔡懷秋;張改改;尹新華;;AMPK與心肌缺血-再灌注損傷[J];國際心血管病雜志;2013年01期

7 王艷;黃德強;羅志軍;;AMPK對線粒體功能的調(diào)節(jié)[J];中國細胞生物學(xué)學(xué)報;2013年10期

8 馬繼政;孫飆;;AMPK調(diào)節(jié)運動中骨骼肌細胞代謝研究進展[J];中國運動醫(yī)學(xué)雜志;2010年05期

9 賈振華;劉毅;曹銘鋒;徐靜;完強;王榮;;AMPK在高糖誘導(dǎo)大鼠腎小球系膜細胞Ⅳ型膠原過度表達中的作用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2010年11期

10 楊航;王睿思;楊吉春;管又飛;;蛋白激酶AMPK在腎髓間質(zhì)細胞存活中的作用[J];中國病理生理雜志;2010年10期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;Co-commitment and Interplay between Akt and AMPK in the Regulation of Endothelial NO Synthase Phosphorylation by Reactive Oxygen Species[A];第九屆全國心血管藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

2 Paul M Vanhoutte;;SIRT1 and AMPK:the Seesaw Effect in Regulating Endothelial Sene-scence[A];第八屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文集[C];2011年

3 李瑾;朱海波;;新結(jié)構(gòu)類型調(diào)血脂化合物與靶蛋白AMPK分子間相互作用初步解析[A];全國第十二屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

4 宋海燕;李強;孫玉倩;張巾超;鄔艷慧;;AMPK結(jié)合蛋白的篩選及其與2型糖尿病的關(guān)系研究[A];2008內(nèi)分泌代謝性疾病系列研討會暨中青年英文論壇論文匯編[C];2008年

5 ;AMPK mediated an apoptotic response to combined effect of hypoxia stress and ER stress[A];2012全國發(fā)育生物學(xué)大會摘要集[C];2012年

6 ZHANG Jian-wei;MA Xiao-wei;DENG Rui-fen;DING Shan;GU Nan;GUO Xiao-hui;;Genetic variability in AMPKαl gene may have synergetic effect with smoking on risk of coronary artery disease in chinese type 2 diabetics[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

7 姚遠;周京軍;裴建明;;AMPK介導(dǎo)無鈣預(yù)處理心肌保護作用[A];中國生理學(xué)會第九屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2011年

8 季樂樂;Haifeng Zhang;Feng Gao;;A novel mechanism of preconditioning:Attenuating reperfusion injury through enhanced myocardial glucose uptake via insulin-stimulated Akt and AMPK activation[A];中國生理學(xué)會第十屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2013年

9 WU Qiao;;The orphan nuclear receptor Nur77 regulates AMPK activity through LKB1 subcellular localization in glucose metabolism[A];細胞—生命的基礎(chǔ)——中國細胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

10 Jia-Wei Wu;;Conserved elements in allosteric regulation of AMPK[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第十一次會員代表大會暨2014年全國學(xué)術(shù)會議論文集——專題報告二[C];2014年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 黃敏;精力充沛基因決定?[N];新華每日電訊;2011年

2 實習(xí)生 程鳳;不愛鍛煉可能與基因缺失有關(guān)[N];科技日報;2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳雷;AMP激活的蛋白質(zhì)激酶（AMPK）調(diào)控機制的研究[D];清華大學(xué);2010年

2 朱莉;電鏡單顆粒技術(shù)研究全長AMPK蛋白的構(gòu)架及變構(gòu)效應(yīng)[D];蘭州大學(xué);2011年

3 符慶瑛;大腸桿菌雙雜交篩選AMPKα2相互作用蛋白[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

4 鄧虎平;燙傷大鼠骨骼肌AMPK的活化對蛋白分解的作用及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學(xué)院;2010年

5 余冰;AMPK對應(yīng)激狀態(tài)下仔豬脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

6 梁俊芳;AMPKα亞基對小鼠骨骼肌生長發(fā)育及宰后糖酵解過程的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 李澤;AMPK活性對宰后羊肉能量代謝和肉質(zhì)的影響及其機理研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 朱曉靜;AMP激活的蛋白激酶在鹵蟲發(fā)育過程和應(yīng)激條件下的分子特征和功能研究[D];浙江大學(xué);2008年

9 陳曉春;AMPK對產(chǎn)蛋雞膽固醇代謝的調(diào)節(jié)作用[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 袁世英;AMPK信號通路在大鼠慢性糖皮質(zhì)激素應(yīng)激中的作用及機制[D];華中科技大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張遠遠;AMPK基因在2型糖尿病發(fā)病中的作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

2 王璐;AMPK調(diào)節(jié)小鼠耐力變化的機制研究[D];北京體育大學(xué);2012年

3 王艷;AMPK在線粒體中的分布及線粒體中AMPKα1對細胞自噬的影響[D];南昌大學(xué);2014年

4 李曉山;膳食與大鼠肝組織AMPK表達及肥胖的關(guān)系[D];華中科技大學(xué);2008年

5 秦玉輝;蛋雞體內(nèi)AMPK酶活分布及應(yīng)激對AMPK酶活影響研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

6 宋曉彬;AMPK活性對宰后羊肉糖酵解和肉品質(zhì)的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 陸地;急性內(nèi)毒素血癥早期大鼠血糖變化與AMPK關(guān)系的研究[D];浙江大學(xué);2009年

8 徐靜;高糖環(huán)境對大鼠腎小球系膜細胞AMPK表達及活性的影響[D];山東大學(xué);2009年

9 賈振華;AMPK在高糖誘導(dǎo)大鼠腎小球系膜細胞Ⅳ型膠原過度表達中的作用[D];山東大學(xué);2010年

10 廖波;豬肝細胞的分離培養(yǎng)和AMPK活性調(diào)控的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

本文編號：1000335