本文關鍵詞：膠質(zhì)瘤中S100A4的表達和其在膠質(zhì)瘤細胞侵襲遷移中作用的研究

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【摘要】：惡性膠質(zhì)瘤是最常見的原發(fā)性神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,現(xiàn)階段的臨床治療原則是以手術為主、輔以放射和化學藥物治療的綜合治療。單憑現(xiàn)有的臨床方案,雖然在一定程度上提高了患者的生存質(zhì)量及或延長了生存期,但尚不能治愈。由于惡性膠質(zhì)瘤侵襲、播散性的生長方式,患者即使接受了規(guī)范化治療,中位生存期也僅為14個月。而針對腫瘤惡性進展的分子靶向治療為膠質(zhì)瘤的治愈提供了可能。近些年來,研究主要集中在膠質(zhì)瘤分子生物學的機制上,力圖尋找新的分子靶點,并通過抑制這些靶點對膠質(zhì)瘤的生長、增殖、遷移和侵襲起到抑制作用。S100A4是S100蛋白超家族成員之一,是一種低分子量(10-12KDa)、鈣離子依賴性的蛋白,以同源或異源二聚體的形式存在于細胞的胞質(zhì)、胞核或胞質(zhì)胞核共存。S100A4蛋白與其他家族成員一樣,不具有酶促的活性,而是通過調(diào)控其他蛋白的表達和直接與靶蛋白結(jié)合兩種方式發(fā)揮作用。相關研究表明,S100A4具有廣泛的生物學功能,與許多惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系,提示S100A4可能成為治療惡性膠質(zhì)瘤分子生物學靶點的其中一員。惡性膠質(zhì)瘤細胞在腦組織中的遷移運動大體可分為四個步驟:①膠質(zhì)瘤細胞脫離原發(fā)的腫瘤團塊;②膠質(zhì)瘤細胞粘附于細胞外基質(zhì);③膠質(zhì)瘤細胞降解細胞外基質(zhì);④膠質(zhì)瘤細胞改變自身形狀,細胞體向前運動。抑制膠質(zhì)瘤向周圍正常腦組織浸潤或者復發(fā),控制膠質(zhì)瘤細胞這種遷移運動是有效方法之一。本課題在膠質(zhì)瘤組織和細胞系中檢測S100A4的表達,并通過體外實驗在高表達S100A4的膠質(zhì)瘤細胞系中探究其在上述細胞遷移運動四個步驟中的作用及其機制。課題研究分為以下兩個部分:1、檢測S100A4在膠質(zhì)瘤組織及細胞系中的表達。首先對本院手術留取的43例不同級別的膠質(zhì)瘤組織標本及11例對照腦組織標本進行免疫組織化學染色,檢測不同標本中S100A4的表達含量;然后采用Real-time PCR、Western blot方法分別檢測了胃黏膜上皮細胞系GES-1和四個惡性膠質(zhì)瘤細胞系中S100A4mRNA和蛋白的表達量。結(jié)果顯示,S100A4在對照腦組織中呈陰性或弱陽性表達,在膠質(zhì)瘤組織中呈陽性表達,陽性結(jié)果表現(xiàn)為胞核陽性、胞質(zhì)陽性或者核質(zhì)陽性,并且隨著腫瘤級別的增高陽性率也增高;以胃黏膜上皮細胞系GES-1為對照,S100A4 mRNA和蛋白在U87、LN229、U251和SNB19這4個膠質(zhì)瘤細胞系中均顯著高表達,PCR和Western blot的檢測結(jié)果一致。2、體外實驗研究S100A4在膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲中的作用。在SNB19和U251兩種細胞系中,用S100A4特異性的siRNA進行處理,并且相應的分成control組、siRNA-NC組和siRNA-S100A4組。在不同的處理組中,PCR和Western blot檢測S100A4 mRNA和蛋白的表達情況,劃痕實驗檢測膠質(zhì)瘤細胞的遷移能力,Transwell實驗檢測膠質(zhì)瘤細胞侵襲的能力,Western blot技術檢測膠質(zhì)瘤細胞E-cadherin、N-cadherin、Vimintin、MMP-9和MMP-2的表達量,免疫熒光技術檢測S100A4的表達情況與細胞片狀偽足、細胞黏著斑的形成情況。免疫共沉淀技術和免疫熒光技術分別檢測S100A4蛋白與非肌細胞肌球蛋白IIA亞型(NM IIA)的結(jié)合情況。結(jié)果顯示:S100A4特異性的si RNA可以有效的敲低膠質(zhì)瘤細胞中S100A4的表達,進而抑制細胞遷移和侵襲的能力;與control組和siRNA-NC組相比,siRNA-S100A4組膠質(zhì)瘤細胞E-cadherin的表達明顯上調(diào),N-cadherin、Vimintin、MMP-9和MMP-2的表達明顯降低。在膠質(zhì)瘤細胞中,S100A4蛋白能與NM IIA相結(jié)合,并主要定位于細胞的前端片狀偽足處;siRNA-S100A4組細胞的片狀偽足明顯變小或者不在向前伸出,黏著斑變大、熒光強度變強。結(jié)論:1、與對照腦組織相比,膠質(zhì)瘤組織中S100A4呈高表達,并且高級別膠質(zhì)瘤組織中S100A4的表達量明顯高于低級別膠質(zhì)瘤組織中的表達量。2、在惡性膠質(zhì)瘤細胞系中,S100A4的表達含量增高,并且敲低S100A4的表達可抑制膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲的能力。3、S100A4在膠質(zhì)瘤細胞發(fā)生遷移和侵襲的全過程中發(fā)揮作用。4、S100A4可能成為抗膠質(zhì)瘤侵襲遷移治療的有效靶點。
【關鍵詞】：膠質(zhì)瘤 S100A4 侵襲 遷移 NMIIA
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略語/符號說明9-12
• 前言12-14
• 研究成果、現(xiàn)狀12-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、S100A4在膠質(zhì)瘤組織及膠質(zhì)瘤細胞系中的表達14-26
• 1.1 對象和方法14-22
• 1.1.1 病歷資料和實驗對象14
• 1.1.2 實驗試劑與儀器14-16
• 1.1.3 實驗方法16-21
• 1.1.4 統(tǒng)計學方法21-22
• 1.2 結(jié)果22-24
• 1.2.1 免疫組化結(jié)果22-23
• 1.2.2 PCR檢測細胞系中S100A4 mRNA的表達23
• 1.2.3 Western blot檢測細胞系中S100A4蛋白的表達23-24
• 1.3 討論24-25
• 1.4 小結(jié)25-26
• 二、探究S100A4在膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲中的作用26-48
• 2.1 對象和方法26-33
• 2.1.1 實驗對象、材料和主要儀器26-27
• 2.1.2 實驗方法27-32
• 2.1.3 統(tǒng)計學方法32-33
• 2.2 結(jié)果33-43
• 2.2.1 細胞生長情況33
• 2.2.2 RT-PCR和Western blot篩選出效果最佳的S100A4 siRNA序列33-35
• 2.2.3 PCR和Western blot分別檢測不同處理組中S100A4 mRNA和蛋白的表達情況35-36
• 2.2.4 敲低S100A4的表達對細胞遷移能力的影響36-37
• 2.2.5 敲低S100A4的表達對細胞侵襲能力的影響37-38
• 2.2.6 Western blot檢測相關蛋白的表達情況38-39
• 2.2.7 免疫熒光檢測S100A4與細胞偽足形成的關系39-40
• 2.2.8 免疫熒光檢測S100A4與細胞黏著斑形成的關系40-42
• 2.2.9 免疫共沉淀和免疫熒光檢測膠質(zhì)瘤細胞內(nèi)S100A4與NM IIA結(jié)合及定位42-43
• 2.3 討論43-46
• 2.4 小結(jié)46-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明55-57
• 綜述 膠質(zhì)母細胞瘤侵襲性機制的相關研究進展57-67
• 綜述參考文獻62-67
• 致謝67

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