本文關鍵詞：腦膠質瘤中MGMT基因啟動子甲基化與表達的關聯分析及與SNP的相關探究

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【摘要】：腦膠質瘤(Glioma)是成年人中最常見的原發(fā)性腦腫瘤。臨床研究表明06-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶(06-methylguanine-DNA methyltransferese,MGMT)表達水平和基因甲基化與術后接受替莫唑胺(Temozolomid,TMZ)治療的腦膠質瘤病人存活時間的長短存在著密切的關系。MGMT基因啟動子區(qū)域中SNP的基因型、CpG位點的甲基化程度與基因的表達存在著緊密的關聯.MGMT基因啟動子區(qū)域甲基化程度已經成為TMZ治療的腦膠質瘤患者的一個獨立的預測因素.MGMT基因啟動子區(qū)域98個CpG位點的甲基化程度存在著很大的異質性,目前臨床上對MGMT基因的檢測僅僅集中在9個CpG位點之內,這些位點能否準確反應基因甲基化水平仍然存在爭議。本研究收集了60多例中國腦膠質瘤患者的新鮮腦組織樣本,用直接測序法檢測了MGMT基因啟動子區(qū)域的7個SNP位點的基因型,焦磷酸測序法對MGMT基因啟動子區(qū)域98個CpG位點進行了全部掃描,并用qRT-PCR法檢測了樣本的mRNA表達水平。試圖尋找與MGMT基因表達最密切相關的SNP位點,以及CpG位點與CpG區(qū)域。結果發(fā)現：SNP位點rs11016798的TT基因型與MGMT的低表達具有顯著的相關性(p0.05)；在不同腦膠質瘤患者中,MGMT基因甲基化存在著顯著差異；高甲基化組包括14例樣本,平均甲基化水平為37.4%,低甲基化組包含28例樣本,平均甲基化水平為12.9%,樣本內MGMT基因表達水平與甲基化程度存在著密切的相關性(p0.001)；位于啟動子-436到-374,-342到-249,-228到-172,95到153這四個區(qū)域中的共38個CpG位點的高甲基化顯著抑制了MGMT基因的表達(p0.0001)；腦膠質瘤預后相關基因IDH1的突變與MGMT基因的高甲基化存在著顯著的相關性(p0.05).總之,在腦膠質瘤患者MGMT基因的相關性探究中,我們分析得到了一些與基因表達密切相關的SNP位點和CpG位點,為將來中國腦膠質瘤患者個體化化療用藥提供依據。
【關鍵詞】：腦膠質瘤 MGMT基因 SNP 甲基化 焦磷酸測序
【學位授予單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 前言7-9
• 第一章 緒論9-20
• 1.1 腦膠質瘤概述9-10
• 1.2 MGMT基因檢測與腦膠質瘤病人的個體化用藥10-14
• 1.2.1 替莫唑胺介紹10-11
• 1.2.2 MGMT基因結構11-12
• 1.2.3 MGMT基因檢測與TMZ用藥與腦膠質瘤的相關性12-14
• 1.3 MGMT基因的檢測方法與研究進展14-18
• 1.3.1 MGMT基因啟動子區(qū)域甲基化檢測方法及研究進展14-18
• 1.3.2 MGMT基因啟動子區(qū)域SNP檢測方法及研究進展18
• 1.4 立題背景與意義18-20
• 第二章 實驗方法的建立20-28
• 2.1 實驗整體設計思路20
• 2.2 實驗材料20-21
• 2.2.1 實驗儀器和軟件20
• 2.2.2 實驗試劑和材料20-21
• 2.3 實驗方法的建立21-27
• 2.3.1 引物的設計與制備21-24
• 2.3.2 新鮮組織中總DNA的提取24-25
• 2.3.3 DNA樣本的重亞硫酸鹽轉化25-26
• 2.3.4 新鮮組織中總RNA的提取26-27
• 2.3.5 實驗結果與分析27
• 2.4 本章小結27-28
• 第三章 MGMT基因啟動子區(qū)域SNP與甲基化的檢測28-44
• 3.1 MGMT啟動子區(qū)域SNP檢測28-33
• 3.1.1 SNP檢測方法與原理28
• 3.1.2 實驗儀器和試劑28
• 3.1.3 實驗具體過程28-30
• 3.1.4 實驗結果與分析30-33
• 3.2 MGMT基因啟動子區(qū)域甲基化的檢測33-42
• 3.2.1 甲基化檢測方法與原理33-34
• 3.2.2 實驗儀器和試劑34
• 3.2.3 實驗具體過程34-36
• 3.2.4 實驗結果與分析36-42
• 3.3 本章小結42-44
• 第四章 MGMT基因表達的檢測及結果的相關性分析44-56
• 4.1 檢測方法與原理44-45
• 4.2 實驗儀器和試劑45
• 4.3 實驗具體過程45-46
• 4.4 實驗結果46-49
• 4.5 數據分析49-54
• 4.5.1 與表達相關的MGMT基因甲基化位點分析49-52
• 4.5.2 SNP位點基因型與基因甲基化、表達的相關性分析52-53
• 4.5.3 IDH1突變與MGMT基因表達的相關性分析53-54
• 4.6 本章小結54-56
• 全文總結56-57
• 參考文獻57-64
• 攻讀碩士學位期間參加的主要科研項目64-65
• 致謝65-66

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前6條

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本文編號：865827