本文關(guān)鍵詞：非神經(jīng)元型膽堿能系統(tǒng)在重癥肌無力胸腺組織中的表達(dá)

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【摘要】：目的重癥肌無力(Myasthenia Gravis,MG)是一種以反復(fù)活動(dòng)后橫紋肌無力為臨床表現(xiàn)的自身免疫性疾病。約80%~90%患者血清中存在乙酰膽堿受體抗體(acetylcholine receptor antibody,Ach Rab),Ach Rab與神經(jīng)肌肉突觸膜上的乙酰膽堿受體結(jié)合,主要通過競(jìng)爭(zhēng)占領(lǐng)及補(bǔ)體參與等機(jī)制導(dǎo)致神經(jīng)沖動(dòng)不能下傳進(jìn)而導(dǎo)致肌無力癥狀。MG患者大約70%存在異常胸腺病理改變,胸腺瘤(分為A型、B型、AB型)占其的10~15%,胸腺增生占其中的50~60%。張清勇教授的研究已發(fā)現(xiàn)胸腺瘤和胸腺增生組織乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶表達(dá)增高,胸腺增生組織乙酰膽堿受體表達(dá)高于胸腺瘤胸腺組織,胸腺萎縮組織乙酰膽堿受體表達(dá)低于正常胸腺組織[1]。研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體免疫細(xì)胞以及上皮細(xì)胞上都存在非神經(jīng)元型膽堿能系統(tǒng),其主要由乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(choline acetyl transferase,CHAT)、乙酰膽堿酯酶(acetylcholin esterase,Ach E)、n Ach R(α1-α10、β1-β4、γ)、m Ach R(m1-m5)、乙酰膽堿等組成[2]。國外研究者發(fā)現(xiàn)刺激n Ach R和m Ach R可以產(chǎn)生很多生物學(xué)以及功能的改變[3]。我們希望通過研究MG患者胸腺組織非神經(jīng)元型膽堿能系統(tǒng)的改變,探討其對(duì)乙酰膽堿受體抗體產(chǎn)生的影響。方法30例中重癥肌無力患者胸腺組織,所有患者均經(jīng)過臨床確診并進(jìn)行胸腺切除+前縱膈脂肪組織清除術(shù),其中男性18例,女性12例,年齡18~42歲;對(duì)照組為非自身免疫性先天性心臟病患者行開胸手術(shù)者的20例胸腺組織,年齡2~12歲。采集標(biāo)本時(shí)取得患者和家屬的同意,所有患者均簽署知情同意書。免疫組化標(biāo)本收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科2013-2015年度130例胸腺組織石蠟切塊。1.m Ach R(m1、m2、m3、m4、m5)、n Ach R(α1,α2,α3,α4,α5,α6,α7,α9,α10,β1,β2,β3,β4)、CHAT及Ach E的m RNA的檢測(cè):提取MG患者組及正常對(duì)照組胸腺組織的總RNA,通過熒光定量PCR檢測(cè)m1、m2、m3、m4、m5、α1,α2,α3,α4,α5,α6,α7,α9,α10,β1,β2,β3,β4,CHAT及Ach E的m RNA表達(dá)水平,采用2-△△Ct法在MG患者組和正常對(duì)照組之間進(jìn)行相對(duì)定量的比較;2.α1、α2、α9、m3以及β2分子在胸腺組織的分布與表達(dá):制作胸腺組織石蠟切片,通過免疫組織化學(xué)了解α1、α2、α9、m3以及β2在胸腺組織的分布與表達(dá);3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用SPSS 21..0軟件。用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(SX±)分析數(shù)據(jù),兩組均數(shù)的比較用t檢驗(yàn),當(dāng)p0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.在胸腺組織中有m1、m2、m3、m4、m5、α1,α2,α3,α4,α5,α6,α7,α9,α10,β1,β2,β3,β4,CHAT及Ach E m RNA的表達(dá):MG患者胸腺組織中的α1、α9、m3的m RNA的表達(dá)水平顯著增高,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其中α2、β2的m RNA表達(dá)水平顯著降低,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而MG患者胸腺組織中α3,α5,α6,α7,α10,β1,β3,β4,γ,CHAT、m1,m2,m4,m5的m RNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.α1、α2、α9、m3以及β2分子在胸腺細(xì)胞的分布與表達(dá)::α1、α2、α9、m3、β2的陽性表達(dá)呈現(xiàn)出棕黃色顆粒,主要在胞質(zhì)及胞膜表達(dá),偶爾也可在細(xì)胞核中表達(dá)。見圖3.4。MG患者胸腺組織α1表達(dá)陽性,并且顯著高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);MG患者胸腺組織α2表達(dá)陽性,β2表達(dá)弱陽性,顯著低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);α9、m3在MG胸腺組織與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論MG患者胸腺組織中α1的表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著增高,α2、β2的m RNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著降低。α1、α2及β2在重癥肌無力患者胸腺組織中表達(dá)均陽性,主要分布于胸腺細(xì)胞的胞膜及胞質(zhì)。以上證據(jù)表明重癥肌無力患者的胸腺組織費(fèi)神經(jīng)元型膽堿能系統(tǒng)發(fā)生改變。
【關(guān)鍵詞】：重癥肌無力 胸腺 非神經(jīng)元型膽堿能系統(tǒng) 熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R746.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮略詞對(duì)照表11-12
• 1 前言12-16
• 2 材料和方法16-24
• 3 結(jié)果24-27
• 4 討論27-30
• 參考文獻(xiàn)30-32
• 綜述 非神經(jīng)元型膽堿能系統(tǒng)32-46
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷46-47
• 致謝47

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