本文關(guān)鍵詞：大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)、純化及采用HCA技術(shù)進(jìn)行GFAP鑒定

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【摘要】：目的探索大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte,AS)的分離、原代培養(yǎng)及純化方法,采用高內(nèi)涵細(xì)胞成像分析技術(shù)(high content analysis,HCA)對其進(jìn)行膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鑒定。方法取2、3 d的新生SD大鼠,體視顯微鏡下獲取大腦皮質(zhì),機(jī)械分離成1 mm3組織碎塊,采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.25%的胰蛋白酶和0.2%的膠原酶(體積比為1∶1)消化后進(jìn)行體外培養(yǎng),分別觀察接種1 h、3 d、5 d后原代AS基本形態(tài)結(jié)構(gòu),酶消化3 min后,接種30 min,5 d后傳代AS基本形態(tài)結(jié)構(gòu);采用多次、多階段的差速貼壁和震蕩相結(jié)合的方法純化細(xì)胞;采用HCA技術(shù)對AS進(jìn)行GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。結(jié)果采用本法培養(yǎng)的大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞,數(shù)量多、活性佳、純度高,胞突豐富且細(xì)長,并相互交織成網(wǎng),呈現(xiàn)典型而良好的生長狀態(tài);經(jīng)本法純化后的星形膠質(zhì)細(xì)胞,細(xì)胞純度明顯提高;經(jīng)HCA技術(shù)進(jìn)行GFAP鑒定,AS純度質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)98%以上,且圖片質(zhì)量佳。結(jié)論建立了一種大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)及純化方法,采用高內(nèi)涵細(xì)胞成像分析技術(shù)進(jìn)行GFAP鑒定的圖片質(zhì)量明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法,該技術(shù)值得推廣和應(yīng)用。
【作者單位】： 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院;湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國家重點實驗室培育基地;
【關(guān)鍵詞】： 腦皮質(zhì) 星形膠質(zhì)細(xì)胞 原代培養(yǎng) 純化 高內(nèi)涵細(xì)胞成像分析技術(shù)(HCA) 鑒定 膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81573965);國家自然科學(xué)基金資助項目(81403379) 湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國家重點實驗培育基地開放基金資助項目(ZYFT201401)
【分類號】：R741
【正文快照】：

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本文編號：797328