發(fā)布時間：2017-09-05 08:37

  本文關鍵詞：胚胎干細胞定向誘導的多巴胺能神經(jīng)元及其對食蟹猴的移植研究

  更多相關文章： 人胚胎干細胞 多巴胺分化 中腦多巴胺能神經(jīng)元 食蟹猴 細胞移植

【摘要】：帕金森病是由中腦黑質(zhì)致密部多巴胺神經(jīng)元退化、降解造成的神經(jīng)退行性疾病。它導致肌肉僵硬、震顫、運動遲緩,損害患者的運動、語言和其他能力。在帕金森病患者的黑質(zhì)中,多巴胺能神經(jīng)元大量病變降解,使通過該回路作用于紋狀體的多巴胺明顯缺乏,其低于閾值時就會導致多種運動障礙癥狀的出現(xiàn)。因為多巴胺能神經(jīng)元屬于神經(jīng)終末細胞,幾乎沒有增殖能力,無法自我修復補充,因此,傳統(tǒng)的藥物和手術療法都對這類疾病束手無策。1990年,Lindvall等首次將8-9周齡流產(chǎn)胎兒的中腦組織移植到帕金森病患者的殼核中,得了一定的治療療效,開辟了細胞移植療法的新天地。 在體外將胚胎干細胞定向誘導為多巴胺能神經(jīng)元,移植替代體內(nèi)退化神經(jīng)元的治療方案被認為是最具希望的帕金森病治療方式之一。在本論文中,采用階段誘導法,先將人胚胎干細胞(hESC)快速轉(zhuǎn)化為均一完全的特定神經(jīng)干細胞球,然后在不同的時間點添加誘導因子,例如,FGF8、SHH和Purmorphane。通過模擬體內(nèi)神經(jīng)發(fā)育,激活相關信號通路,促使其進入中腦多巴胺能神經(jīng)元細胞分化命運,使其自發(fā)成熟,高效誘導為中腦多巴胺能神經(jīng)元。誘導得到的多巴胺能神經(jīng)元前體細胞,在向食蟹猴體內(nèi)移植一個月后,可觀察到誘導的細胞在體內(nèi)分化成熟為多巴胺細胞。該誘導方法,不但提高了胚胎干細胞來源的多巴胺能神經(jīng)元前體細胞的分化純度,也通過懸浮培養(yǎng),實現(xiàn)了神經(jīng)前體細胞的大量擴增,可以提供大量的種子細胞。因此,該分化體系的建立,為以細胞移植為基礎的帕金森病的治療提供了重要基礎。
【關鍵詞】：人胚胎干細胞 多巴胺分化 中腦多巴胺能神經(jīng)元 食蟹猴 細胞移植
【學位授予單位】：云南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.5
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一章 前言9-22
• 一、帕金森氏病和目前的治療方法9-12
• 1. 帕金森氏病的臨床癥狀和病因9-10
• 2. 帕金森病的治療方法和進展10-12
• 二、干細胞誘導為多巴胺能神經(jīng)元的研究12-22
• 1. 多巴胺能神經(jīng)元的功能和分類12-13
• 2. 中腦多巴胺能神經(jīng)元在體內(nèi)的發(fā)育和各階段轉(zhuǎn)錄因子表達13-22
• 第二章 材料與方法22-38
• 一、人胚胎干細胞的培養(yǎng)和鑒定以及細胞的懸浮培養(yǎng)22-29
• 1. 飼養(yǎng)層細胞的準備22-23
• 2. 人胚胎干細胞的培養(yǎng)23
• 3. 人胚胎干細胞的懸浮培養(yǎng)23-24
• 4. 人胚胎干細胞的鑒定24-25
• 5. 試驗材料和試劑配制25-29
• 二、神經(jīng)干細胞的誘導29-32
• 1. 貼壁方法誘導胚胎干細胞分化為神經(jīng)干細胞29
• 2. 懸浮方法誘導胚胎干細胞分化為神經(jīng)球29-30
• 3. 神經(jīng)干細胞的鑒定和不同培養(yǎng)體系的比較30
• 4. 試驗材料和試劑配制30-32
• 三、多巴胺能神經(jīng)細胞的誘導32-35
• 1. 神經(jīng)干細胞啟動時間點的選擇和鑒定32
• 2. 貼壁來源的神經(jīng)干細胞的分化32
• 3. 神經(jīng)球來源的神經(jīng)干細胞的分化32-34
• 4. 多巴胺能神經(jīng)前體細胞的鑒定34
• 5. 多巴胺能神經(jīng)細胞的自發(fā)成熟和鑒定34
• 6. 試劑配制34-35
• 四、誘導多巴胺能細胞的移植35-38
• 1. 移植細胞的準備35-36
• 2. 動物腦部定位和手術36
• 3. 組織取材和免疫組化的鑒定36-37
• 4. 試驗材料和試劑配制37-38
• 第三章 結(jié)果與討論38-50
• 一、人胚胎干細胞的培養(yǎng)和鑒定以及細胞的懸浮培養(yǎng)38-40
• 1. hESCs貼壁生長形態(tài)觀察38
• 2. 干細胞球多能性基因檢測38-40
• 二、神經(jīng)干細胞的誘導40-41
• 三、多巴胺能神經(jīng)細胞的誘導41-47
• 1. 神經(jīng)干細胞啟動時間點的選擇41-43
• 2. 多巴胺能神經(jīng)前體細胞的分化效率43-44
• 3. 誘導的多巴胺能神經(jīng)細胞自發(fā)成熟44-47
• 四、誘導多巴胺能細胞的移植47-48
• 討論48-50
• 第四章 展望50-51
• 致謝51-52
• 參考文獻52-57

【共引文獻】

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本文編號：796958