本文關鍵詞：微環(huán)境誘導iPSCs和BMSCs向神經(jīng)元樣細胞分化-Reelin對細胞分化和極性化的調節(jié)作用

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【摘要】：目的:研究小鼠誘導性多能干細胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)和小鼠骨髓間充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在大腦微環(huán)境的誘導下向神經(jīng)元樣細胞分化的過程;尤其是探討細胞極性的關鍵分子Reelin蛋白對干細胞分化的影響。方法:將iPSCs和BMSCs分別與WT和Reelin缺失小鼠(reeler小鼠)的海馬腦片以及兩種小鼠的腦勻漿上清共培養(yǎng),觀察二者在腦片微環(huán)境下的細胞分化和極性化改變,揭示Reelin蛋白對細胞分化和極性化的影響。結果:與WT和Reeler小鼠腦片共培養(yǎng)的iPSCs和BMSCs均出現(xiàn)神經(jīng)元樣細胞的分化。二者在WT小鼠海馬腦片呈雙C字型海馬片層化分布,同時表現(xiàn)出很強的方位性;而與reeler小鼠海馬腦片共培養(yǎng)的細胞分布則無明顯規(guī)律性,呈均勻分布。此外,與腦勻漿上清培養(yǎng)基共培養(yǎng)的iPSCs和BMSCs,在共培養(yǎng)72小時后,部分類神經(jīng)元樣細胞可以被神經(jīng)干細胞標記物(Nestin)和神經(jīng)元特異標記物(NeuN)所標記,表明他們可以分化成為功能性神經(jīng)元。且在共培養(yǎng)初期reeler微環(huán)境培養(yǎng)基中神經(jīng)元分化和突起生長相對滯后。結論:在大腦微環(huán)境的誘導下,iPSCs和BMSCs可以向神經(jīng)元樣細胞,甚至功能性神經(jīng)元分化,Reelin蛋白參與了細胞極性化過程,Reelin缺乏可造成神經(jīng)細胞極性紊亂,并對神經(jīng)元分化及突起生長有一定影響。
【關鍵詞】：誘導多能干細胞 骨髓間充質干細胞 Reelin蛋白 大腦微環(huán)境 細胞分化 細胞極性化
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 引言8-10
• 1 儀器材料與實驗方法10-24
• 1.1 儀器與材料10-16
• 1.1.1 實驗儀器10
• 1.1.2 試劑耗材10-12
• 1.1.3 試劑配方12-16
• 1.2 實驗方法16-21
• 1.2.1 BMSCs提取與鑒定16-17
• 1.2.2 iPSCs的培養(yǎng)17-18
• 1.2.3 細胞腦片共培養(yǎng)18-20
• 1.2.4 細胞-腦勻漿上清共培養(yǎng)20-21
• 1.2.5 免疫細胞化學標記神經(jīng)元21
• 1.3 統(tǒng)計學處理21-24
• 2 實驗結果24-34
• 2.1 腦片微環(huán)境對iPSCs和BMSCs分化和極性化的作用24-28
• 2.1.1 對照組24-25
• 2.1.2 與WT小鼠腦片共培養(yǎng)25-27
• 2.1.3 與reeler小鼠腦片共培養(yǎng)27-28
• 2.2 腦勻漿上清對iPSCs和BMSCs向神經(jīng)元分化的影響28-34
• 2.2.1 對照組29
• 2.2.2 與WT小鼠腦勻漿上清共培養(yǎng)29-31
• 2.2.3 與reeler小鼠腦勻漿上清共培養(yǎng)31-34
• 3 討論34-38
• 3.1 腦片微環(huán)境對干細胞片層化形成和極性發(fā)生的誘導作用34-35
• 3.2 腦勻漿上清可誘導干細胞向神經(jīng)元分化35
• 3.3 Reelin對細胞極性產(chǎn)生及分化具有一定的調控作用35-38
• 4 結論38-40
• 參考文獻40-44
• 文獻綜述-Reelin調控神經(jīng)元遷移和突觸發(fā)育研究進展44-58
• 參考文獻52-58
• 附錄58-60
• 附錄A 縮略語表58-59
• 附錄B 攻讀學位期間發(fā)表學術論文目錄59-60
• 致謝60-61

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