本文關(guān)鍵詞：縮宮素在脂多糖誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活中的作用及其機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景：神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活化引起的神經(jīng)炎癥被看作是許多神經(jīng)退行性疾病,諸如阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease, AD)、帕金森病(Parkinson's disease, PD)和多發(fā)性硬化癥(Multiple Sclerosis, MS)等發(fā)病的核心病理機(jī)制。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system, CNS)中廣泛存在的免疫細(xì)胞,對炎癥反應(yīng)引起的神經(jīng)毒性起著重要的調(diào)節(jié)作用。小膠質(zhì)細(xì)胞可被脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)、干擾素(interferon, IFN)-γ、β-淀粉樣蛋白等激活,從而導(dǎo)致炎癥性細(xì)胞介質(zhì)的大量產(chǎn)生。這些炎癥性細(xì)胞介質(zhì)包括腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素(interleukin, IL)-6、IL-1β、谷氨酸鹽、一氧化氮和活性氧類等,過度表達(dá)的炎癥性細(xì)胞介質(zhì)共同作用引起神經(jīng)損傷,進(jìn)而導(dǎo)致多種神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生發(fā)展。分枝狀的靜息的小膠質(zhì)細(xì)胞活化后,細(xì)胞表面的分枝減少、緊縮、胞體增厚,最終發(fā)展成激活的阿米巴樣細(xì)胞。因此,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化的抗炎療法有望成為臨床上阻止神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的可行的方式�？s宮素(Oxytocin, OT)一種哺乳動物激素,是由下丘腦視上核和視旁核神經(jīng)元自然分泌的一種九肽,在機(jī)體中發(fā)揮多種作用。OT主要通過中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中大量表達(dá)的G-蛋白偶聯(lián)受體發(fā)揮作用。最新研究表明,OT同樣具有抗炎和抗氧化的特性,可調(diào)節(jié)免疫和抗炎反應(yīng)。外源性O(shè)T的應(yīng)用減輕多種動物損傷模型的組織損傷。OT的保護(hù)作用可能與減弱促炎因子的循環(huán)流動和損傷部位中性粒細(xì)胞浸潤有關(guān)。OT受體拮抗劑的使用可阻斷縮宮素在大鼠的心肌缺血和腦缺血模型中的保護(hù)作用。此外,OT還可減少LPS誘導(dǎo)激活的巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞促炎因子的分泌。但是,關(guān)于OT在LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活中的作用及其機(jī)制尚不明確。本課題,我們研究OT在LPS誘導(dǎo)激活的在體和離體小膠質(zhì)細(xì)胞中的作用,闡明MAPK和NF-κB通路在其中的作用,為治療以小膠質(zhì)細(xì)胞激活為主要病理過程的神經(jīng)退行性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和新的思路。目的：利用LPS建立起體內(nèi)外小膠質(zhì)細(xì)胞活化的模型,研究OT在LPS誘導(dǎo)激活的BV-2細(xì)胞和原代小膠質(zhì)細(xì)胞中的作用及其機(jī)制,探究OT對注射LPS引起的小鼠早期神經(jīng)炎癥的治療作用。方法：培養(yǎng)BV-2細(xì)胞系和小鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞,用OT (0.1,1, 10μM)預(yù)處理2h后,加入LPS (500 ng/ml)。運(yùn)用Western blot、RT-PCR和免疫熒光染色技術(shù)檢測BV-2細(xì)胞和原代小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和炎癥介質(zhì)(TNF-α、IL-1β、iNOS和COX-2)的蛋白和mRNA表達(dá)水平。同時,利用Western blot檢測MAPK和NF-κB信號通路蛋白的表達(dá)。另外,使用鈣離子熒光探針Fluo2-/AM檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選用BALB/C(成年雄性)小鼠,經(jīng)鼻粘膜滴入OT后腹腔注射LPS (500 ng/ml)。運(yùn)用Western blot. RT-PCR和免疫熒光染色技術(shù)檢測小鼠前額皮質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和炎癥介質(zhì)(TNF-α、IL-1β、iNOS和COX-2)的釋放。結(jié)果：OTR在BV-2細(xì)胞和原代小膠質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá),MTT結(jié)果顯示在一定濃度范圍內(nèi)單獨(dú)OT作用或者OT預(yù)處理后再加入LPS對細(xì)胞活性并無明顯影響。OT可抑制LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞和原代小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)和功能的改變,OT預(yù)處理明顯抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,減少炎癥介質(zhì)(TNF-α、IL-1β、iNOS和COX-2)的釋放。另外,OT抑制LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞中磷酸化的ERK和P38的表達(dá),但對JNK信號通路不起作用。OT明顯減弱LPS誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞中[Ca2+]i的升高。LPS誘導(dǎo)的小鼠腦急性炎癥模型結(jié)果表明,OT預(yù)處理明顯減弱小鼠前額皮質(zhì)中小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和炎癥介質(zhì)(TNF-α、IL-1β、iNOS和COX-2)的釋放。結(jié)論：1.OT抑制LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的改變及炎癥介質(zhì)(TNF-α、IL-1β、iNOS和COX-2)的釋放。2.OT通過抑制LPS誘導(dǎo)的ERK/p38 MAPK信號通路的活化,繼而降低炎癥介質(zhì)(TNF-α、IL-1β、iNOS和COX-2)的釋放。3.OT有望成為治療以小膠質(zhì)細(xì)胞激活為主要病理過程的神經(jīng)退行性疾病的新的輔助藥物。
【關(guān)鍵詞】：縮宮素 脂多糖 神經(jīng)炎癥 小膠質(zhì)細(xì)胞激活
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R741
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符號說明12-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-34
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-39
• 討論39-44
• 結(jié)論44-45
• 附圖表45-63
• 參考文獻(xiàn)63-67
• 致謝67-68
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文目錄68-69
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表69

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5 劉鋒,朱長庚;小膠質(zhì)細(xì)胞激活的分子機(jī)制[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2003年02期

6 蔣平,彭艷,倪健,向正華,焦炳華;小膠質(zhì)細(xì)胞蛋白質(zhì)組三維分離方法的建立[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2005年06期

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9 趙洋;孫素真;;小膠質(zhì)細(xì)胞和癲癇[J];中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2008年01期

10 王均輝;孫峰波;秦綠葉;岳鑫;于常海;;異�；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞的特征與功能[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2008年01期

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本文編號：653580