本文關(guān)鍵詞：睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠學(xué)習(xí)記憶的保護(hù)作用

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【摘要】：腦衰老(Brain aging)是一種增齡性腦功能的慢性退行性病變,也是人體整體衰老的重要組成部分。臨床主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶減退、認(rèn)知功能障礙和思維紊亂等。隨著我國人口老齡化的加劇,腦衰老的發(fā)病率正在逐年上升,而且已有低齡化趨勢,這不僅影響到中老年人的生活質(zhì)量,而且還給社會和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)。但是有關(guān)腦衰老具體的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚,目前全世界尚未在治療上取得突破性的進(jìn)展。因此,需要深入探尋腦衰老的發(fā)病機(jī)制和研發(fā)延緩腦衰老的有效治療方法和藥物,為臨床治療腦衰老提供有效的依據(jù)。目的：1.研究內(nèi)分泌衰退對腦衰老的學(xué)習(xí)記憶障礙的影響；2.研究睪丸組織移植手術(shù)對內(nèi)分泌衰退的改善作用；3.研究內(nèi)分泌衰退對海馬神經(jīng)元和雄激素受體信號通路的影響,以及睪丸組織移植手術(shù)的保護(hù)作用。方法：將40只昆明種雄性小鼠隨機(jī)分為四組：假手術(shù)組、去勢組、雄激素對照組(30mg/kg)和睪丸組織塊移植組。切除小鼠雙側(cè)睪丸,建立內(nèi)分泌衰退小鼠模型。將睪丸組織塊植入已去勢小鼠背部皮下或皮下肌肉層,建立同種異體睪丸組織移植模型。造模后,雄激素組小鼠灌胃治療三個月,其他各組給予等量生理鹽水。治療結(jié)束后,取出移植組小鼠背部移植物進(jìn)行肉眼和組織學(xué)觀察；稱量并計算小鼠性腺器官(前列腺和精囊腺)指數(shù)；ELISA法測量各組小鼠血清睪丸酮水平；Morris水迷宮觀察小鼠行為學(xué)變化；HE染色觀察海馬CA1區(qū)形態(tài)學(xué)改變；蛋白免疫印跡檢測小鼠腦內(nèi)雄激素受體和凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9)的表達(dá)；RT-PCR法檢測小鼠腦內(nèi)雄激素受體和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果：1.睪丸組織移植物生長狀況和形態(tài)觀察：通過肉眼觀察,發(fā)現(xiàn)睪丸組織塊與周圍組織之間建立了血管連接；顯微鏡觀察病理切片,可以發(fā)現(xiàn)移植物在形態(tài)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞組成上基本保持完整,在多個生精小管截面中可觀察到生精細(xì)胞,其中包括圓形精子細(xì)胞和長形精子細(xì)胞,但精原細(xì)胞和精母細(xì)胞很少能看到。睪丸2.間質(zhì)見血竇和少量間質(zhì)細(xì)胞。3.睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠性腺器官的影響：與假手術(shù)組相比,去勢組小鼠性腺器官系數(shù)明顯下降(P0.01)；與去勢組相比,移植組小鼠性腺器官系數(shù)顯著增加(P0.01)；與雄激素組相比,移植組小鼠性腺器官系數(shù)無明顯差異(P0.05)。4.睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠內(nèi)分泌水平的影響：與假手術(shù)組相比,去勢組小鼠血清睪丸酮含量明顯下降(P0.01)；與去勢組相比,移植組小鼠血清睪丸酮水平顯著增加(P0.01)；與雄激素組相比,移植組小鼠血清睪丸酮含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠行為學(xué)的影響：與假手術(shù)組相比,去勢組小鼠的潛伏逃逸期縮短,游泳路程明顯增加,穿越平臺的次數(shù)也大幅度地下降(P0.01)；與去勢組小鼠相比,移植組小鼠潛伏逃逸期延長,游泳路程顯著降低,穿越平臺的次數(shù)也顯著性升高(P0.01)；與雄激素組相比,移植組小鼠潛伏逃逸期、游泳路程和穿越平臺的次數(shù)均無顯著差異(P0.05)。6.睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響：從腦組織切片HE染色結(jié)果來看,假手術(shù)組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元有4～6層,排列緊密,整齊和均勻,細(xì)胞層次分明,結(jié)構(gòu)完整,核大而圓,核仁清晰可見；去勢組海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列稀疏而松散,部分區(qū)域細(xì)胞有缺失或裂縫,細(xì)胞間隙大,核固縮,只有1～2層神經(jīng)元,細(xì)胞數(shù)量明顯減少；雄激素組和移植組海馬CA1區(qū)形態(tài)結(jié)構(gòu)較去勢組均有好轉(zhuǎn),神經(jīng)元排列整齊有序,細(xì)胞數(shù)量明顯增多。7.睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠激素受體和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響：與假手術(shù)組相比,去勢組小鼠Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)顯著增加,AR和Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；與去勢組相比,移植組Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)顯著減少,AR和Bcl-2蛋白表達(dá)明顯增加,差異極顯著(P0.01)；與雄激素組相比,移植組腦內(nèi)AR和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)均無明顯差異(P0.05)。8.睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠雄激素受體和凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響：與假手術(shù)組相比,去勢組小鼠AR和凋亡相關(guān)基因的mRNA表達(dá)明顯減弱,表現(xiàn)為弱條帶,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；與去勢組相比,移植組AR和凋亡相關(guān)基因的mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng),表現(xiàn)為高亮度條帶,差異極顯著(P0.01)。與雄激素組相比,移植組腦內(nèi)AR和凋亡相關(guān)基因的mRNA表達(dá)量無明顯差異(P0.05)。結(jié)論：1.切除小鼠雙側(cè)睪丸后,性腺器官指數(shù)大大下降,血清睪丸酮含量也顯著減少,證明了內(nèi)分泌衰退小鼠模型建立比較成功。2.移植睪丸組織塊后,發(fā)現(xiàn)組織移植物與周圍組織建立血管聯(lián)系,病理形態(tài)保持正常,性腺器官重量明顯加重,血清睪丸酮含量大幅度上升,證明了同種異體睪丸組織移植模型建立比較成功。3.睪丸組織移植與雄激素雄激素替代療法效果相當(dāng),可以代替服用雄激素改善腦衰老引起的學(xué)習(xí)記憶障礙。4.睪丸組織移植可能是通過分泌內(nèi)源性睪丸酮,結(jié)合腦內(nèi)雄激素受體,調(diào)控神經(jīng)元凋亡相關(guān)基因的表達(dá),上調(diào)Bcl-2蛋白水平,降低Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表達(dá)量,抑制大腦神經(jīng)元凋亡,進(jìn)而改善學(xué)習(xí)記憶能力。
【關(guān)鍵詞】：腦衰老 學(xué)習(xí)記憶 睪丸組織移植 內(nèi)分泌衰退癡呆型 睪丸酮
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R741;R699.8
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-11
• 英文縮略詞表11-14
• 前言14-18
• 第一部分 同種異體睪丸組織移植術(shù)建立內(nèi)分泌衰退模型的方法18-33
• 1 材料18-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物18
• 1.2 藥品與試劑18-19
• 1.3 主要儀器19
• 2 方法19-25
• 2.1 試劑的配制19
• 2.2 動物模型的制備19-20
• 2.3 給藥與分組20
• 2.4 取材及樣本制備20-21
• 2.5 模型驗(yàn)證21-25
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)分析25
• 3 結(jié)果與分析25-31
• 3.1 睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退小鼠活動狀況的影響25
• 3.2 睪丸組織移植物的生長狀況和形態(tài)觀察25-27
• 3.3 睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠性腺器官系數(shù)的影響27-28
• 3.4 睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠血清睪丸酮含量的影響28
• 3.5 睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠行為學(xué)的影響28-31
• 4 討論31-33
• 第二部分 睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠學(xué)習(xí)記憶損害的改善作用的研究33-53
• 1 材料33-35
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物33
• 1.2 藥品與試劑33-34
• 1.3 主要儀器34-35
• 2 方法35-45
• 2.1 試劑的配制35-36
• 2.2 動物模型的制備36
• 2.3 給藥與分組36
• 2.4 取材及樣本制備36
• 2.5 HE染色觀察海馬神經(jīng)元病理形態(tài)36-37
• 2.6 蛋白免疫印跡法分析雄激素受體和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)37-40
• 2.7 RT-PCR法檢測雄激素受體和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)40-45
• 2.8 統(tǒng)計學(xué)分析45
• 3 結(jié)果與分析45-51
• 3.1 睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠海馬神經(jīng)元的影響45-46
• 3.2 睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠激素受體和凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響46-47
• 3.3 睪丸組織移植對內(nèi)分泌衰退癡呆型小鼠雄激素受體和凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響47-51
• 4 討論51-53
• 總結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 攻讀學(xué)位期間主要成果59-60
• 致謝60-61
• 個人簡歷61

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 鄭璐;邱蕾;張瑤;馮天驕;于建春;張占軍;;遠(yuǎn)志皂苷對快速腦老化鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善及對神經(jīng)遞質(zhì)的影響[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2010年03期

2 崔德華;田小生;王賀成;王維;肖衛(wèi)忠;樊東升;;腦衰老與阿爾茨海默病癥狀出現(xiàn)前階段[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2012年08期

3 陳琛;李素霞;孟適秋;閆薇;孫洪強(qiáng);陸林;;腦衰老相關(guān)認(rèn)知損傷研究進(jìn)展[J];中國老年學(xué)雜志;2015年02期

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本文編號：650970