本文關(guān)鍵詞：P38MAPK抑制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎保護(hù)作用的病理學(xué)研究及機(jī)制探討

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【摘要】：目的:多發(fā)性硬化(multiple sclerosis,MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)的炎性脫髓鞘性疾病,其發(fā)病機(jī)制尚無(wú)定論,近年來(lái)研究表明,MS是遺傳、環(huán)境等因素共同作用而發(fā)生的自身免疫過程,其中少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷引起的髓鞘脫失是MS的主要病理特點(diǎn),因此我們可以看出少突膠質(zhì)細(xì)胞在MS的病理過程中起重要作用。p38MAPK是絲裂素蛋白酶激活物(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)家族中的一員,它對(duì)細(xì)胞內(nèi)外的多種信號(hào)發(fā)生反應(yīng),對(duì)細(xì)胞的適應(yīng)、增殖、分化、存活等有重要的調(diào)節(jié)作用,并參與多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程。前期的研究表明,抑制p38MAPK可以減輕實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠神經(jīng)組織的脫髓鞘,但有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究提出,p38MAPK可以促進(jìn)外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞的分化、再生。因此在EAE中,抑制p38MAPK后對(duì)少突膠質(zhì)細(xì)胞系的具體影響如何仍有待進(jìn)一步研究。本課題研究p38MAPK抑制劑對(duì)EAE小鼠脊髓組織髓鞘、少突膠質(zhì)細(xì)胞的影響,探討p38MAPK抑制劑對(duì)EAE模型起保護(hù)作用的機(jī)制,為MS的治療提供新的思路。方法:以MOG35-55為抗原免疫54只C57BL/6小鼠建立EAE模型。小鼠隨機(jī)分為3組,分別為正常對(duì)照組、EAE對(duì)照組、p38MAPK抑制劑干預(yù)組。自EAE免疫當(dāng)天,p38抑制劑組小鼠給予SB203580 0.2mg/kg每日腹腔注射;正常對(duì)照組及EAE組小鼠給予等量的生理鹽水每日腹腔注射。觀察小鼠的發(fā)病情況、體重變化及神經(jīng)功能評(píng)分。于免疫后第20天(約相當(dāng)于小鼠發(fā)病高峰期)處死小鼠。取小鼠脊髓腰膨大部位的組織進(jìn)行HE染色觀察炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況,透射電鏡和LFB髓鞘染色從病理學(xué)和形態(tài)學(xué)觀察髓鞘脫失和軸索損傷情況,并進(jìn)行p38、p-p38、olig2的免疫組織化學(xué)染色對(duì)比陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)觀察p38MAPK抑制劑對(duì)EAE小鼠細(xì)胞中p38及p-p38的影響,并進(jìn)一步探究其是否可以提高olig2的表達(dá)發(fā)揮促進(jìn)髓鞘再生的作用。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,發(fā)病率用百分?jǐn)?shù)表示,組間比較采用卡方檢驗(yàn),計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±S)表示,多組計(jì)量資料均數(shù)的比較應(yīng)用ANOVA方差分析,組間兩兩比較采用Dunnett-t檢驗(yàn),P0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1各組小鼠臨床表現(xiàn)觀察:正常對(duì)照組小鼠未發(fā)病。發(fā)病高峰期p38MAPK抑制劑組小鼠與EAE組小鼠相比,其發(fā)病率、體重減輕程度及神經(jīng)功能評(píng)分明顯降低(P0.05)。2 HE染色:于發(fā)病高峰期EAE組、p38MAPK抑制劑組與正常對(duì)照組比較,小鼠脊髓組織中的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)明顯增多(P0.05);p38MAPK抑制劑組與EAE組相比較,小鼠脊髓組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)明顯減少(P0.05)。3 LFB染色:EAE組發(fā)病高峰期可見大小不等的斑片狀脫髓鞘區(qū),脊髓白質(zhì)內(nèi)的藍(lán)色髓鞘區(qū)域減少,部分甚至可見空泡樣變性;p38MAPK抑制劑組發(fā)病高峰期可見些許小的髓鞘脫失區(qū)。正常對(duì)照組無(wú)脫髓鞘區(qū)。4透射電鏡:發(fā)病高峰期EAE組小鼠髓鞘的層狀結(jié)構(gòu)排列極為松散,部分髓鞘崩解,斷裂,脫失,軸索萎縮變性,結(jié)構(gòu)不清晰;p38MAPK抑制劑組可見髓鞘排列松散,髓鞘崩解脫失現(xiàn)象及軸索萎縮變性均較少,結(jié)構(gòu)尚清晰。5 p38免疫組織化學(xué):正常對(duì)照組、EAE組及p38MAPK抑制劑組小組脊髓p38免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯差異(p0.05)。6 p-p38免疫組織化學(xué):EAE組與正常對(duì)照組相比,p-p38陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);p38MAPK抑制劑組p-p38陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較正常對(duì)照組無(wú)明顯差異(P0.05);p38MAPK抑制劑組與EAE組相比,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7 olig2免疫組織化學(xué):發(fā)病高峰期p38MAPK抑制劑組免疫陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)目均較EAE組免疫陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)目增多,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1 p38MAPK抑制劑可以延遲EAE的起病時(shí)間,降低發(fā)病率,減輕神經(jīng)功能損傷的程度。2 p38MAPK抑制劑可以減輕EAE動(dòng)物模型的炎性浸潤(rùn),減少髓鞘的大面積脫失,促進(jìn)髓鞘再生,恢復(fù)神經(jīng)的傳導(dǎo)功能。3 p38MAPK抑制劑可以抑制EAE中p38的磷酸化,從而影響其活性作用。4 p38MAPK抑制劑促進(jìn)髓鞘再生的作用可能是通過促進(jìn)早期少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分化實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：多發(fā)性硬化 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎 p38MAPK抑制劑 髓鞘再生 少突膠質(zhì)細(xì)胞 olig2
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R744.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-28
• 附表28-30
• 討論30-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-36
• 綜述36-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 郭紅梅;王曉梅;;Notch信號(hào)通路在神經(jīng)干細(xì)胞分化與再生的研究進(jìn)展[J];中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué);2013年04期

2 任遠(yuǎn);王晗知;肖嵐;;Wnt/β-catenin信號(hào)通路在髓鞘發(fā)育和再生過程中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2012年01期

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本文編號(hào)：639299