本文關(guān)鍵詞：大鼠腦缺血再灌注損傷后Cathepsin L與p-Akt表達(dá)的研究

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【摘要】：目的在腦缺血再灌注后半暗帶區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中溶酶體組織蛋白酶L(Cathepsin L)與磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路均發(fā)揮了重要作用,但關(guān)于兩者在缺血性腦卒中半暗帶區(qū)之間的聯(lián)系研究甚少。通過(guò)建立大鼠大腦中動(dòng)脈腦缺血再灌注損傷模型,運(yùn)用Western blotting檢測(cè)大鼠腦缺血半暗帶各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)Cathepsin L及p-Akt蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化,同時(shí)使用Cathepsin L的特異性抑制劑Z-FY-DMK及PI3K/Akt的特異性抑制劑LY294002分別進(jìn)行干預(yù),觀察蛋白的表達(dá)變化,探討Cathepsin L與p-Akt之間的關(guān)系。方法選取周齡為10-12周的清潔級(jí)健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠85只,體重為280±20g,依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組)10只;腦缺血再灌注組(IRI組)25只;Cathepsin L抑制劑Z-FY-DMK干預(yù)組(CLI組)25只;PI3K-Akt抑制劑LY294002干預(yù)組(LY組)25只,IRI組、CLI組及LY組大鼠分別按3h、6h、12h及24h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每組5只隨機(jī)分為四個(gè)亞組。采用改良longa線栓法制作大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注損傷模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),CLI組、LY組分別ii于術(shù)前30min側(cè)腦室穿刺注入z-fy-dmk(20ug/1ul*5ul)及l(fā)y294002(25μg,5μldmso),sham組及iri組于術(shù)前30分鐘側(cè)腦室注入濃度為10ml/l的dmso5ul。對(duì)大鼠運(yùn)用longa’s5級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分法評(píng)分;ttc染色檢測(cè)各組大鼠24h時(shí)間點(diǎn)相對(duì)腦梗死體積;westernblotting法檢測(cè)半暗帶區(qū)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)cathepsinl、p-akt及24h組caspase3的蛋白表達(dá)變化。結(jié)果1.造模成功率是83.33%。sham組大鼠未見(jiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀;iri組、cli組、ly組大鼠均可見(jiàn)神經(jīng)功能缺損癥狀;與iri組相比,cli組大鼠腦神經(jīng)功能缺損評(píng)分較低,ly組大鼠腦神經(jīng)功能缺損評(píng)分較高(p0.05)。2.ttc染色檢測(cè)sham組大鼠腦組織未見(jiàn)白色梗死灶,iri組、cli組、ly組缺血側(cè)皮質(zhì)均可見(jiàn)蒼白色梗死灶,cli組大鼠腦梗死體積較iri組減小,ly組大鼠腦梗死體積較iri組增加(p㩳0.05)。3.westernblotting檢測(cè)到sham組大鼠缺血側(cè)大腦視前區(qū)皮質(zhì)可見(jiàn)cathepsinl蛋白少許表達(dá),iri組cathepsinl在大鼠腦缺血再灌注后3h、6h、12h呈上升趨勢(shì),12h達(dá)到高峰,24h下降,均高于sham組(p㩳0.05);cli組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)cathepsinl蛋白的表達(dá)較iri組表達(dá)減少(p0.05);ly組cathepsinl表達(dá)在再灌注后3h、6h、12h呈上升趨勢(shì),12h到達(dá)高峰,24h下降,各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)cathepsinl蛋白表達(dá)較iri組增加(p0.05)。sham組大鼠缺血側(cè)大腦視前區(qū)皮質(zhì)可見(jiàn)p-akt蛋白少許表達(dá),iri組p-akt蛋白表達(dá)在大鼠腦缺血再灌注后3h達(dá)高峰,6h、12h有下降,24h再度升高;CLI組p-Akt蛋白表達(dá)在再灌注后3h、6h、12h、24h呈持續(xù)增高趨勢(shì),3h、6h較IRI組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)減少,12h、24h較IRI組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)增高(p0.05);LY組p-Akt蛋白表達(dá)在3h達(dá)高峰,6h、12h有下降,24h再度上升,各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)較IRI組都有減少(p0.05)。4.Western blotting檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組大鼠缺血側(cè)大腦皮質(zhì)視前區(qū)24h時(shí)間點(diǎn)caspase 3蛋白表達(dá):Sham組幾乎不表達(dá),IRI組、CLI組、LY組明顯表達(dá),CLI組較IRI組表達(dá)少(P0.05),LY組較IRI組表達(dá)增加(P0.05)。結(jié)論1.大鼠腦缺血再灌注損傷后,大鼠腦缺血半暗帶Cathepsin L與p-Akt的表達(dá)具有一定相關(guān)性。2.大鼠腦缺血再灌注損傷后,Z-FY-DMK可能通過(guò)抑制Cathepsin L減少Caspase 3表達(dá),減輕腦損傷;LY294002可能通過(guò)抑制PI3K/Akt信號(hào)通路,增加Caspase 3表達(dá),加重腦損傷。
【關(guān)鍵詞】：腦缺血再灌注 Cathepsin L p-Akt Caspase 3
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 第1章 緒論13-15
• 第2章 材料與方法15-21
• 2.1 材料15-16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-20
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析20-21
• 第3章 結(jié)果21-29
• 3.1 動(dòng)物模型成功率及神經(jīng)功能缺損評(píng)分21-22
• 3.2 TTC染色22-23
• 3.3 Western blotting檢測(cè)Cathepsin L的蛋白表達(dá)23-24
• 3.4 Western blotting檢測(cè)p-Akt的蛋白表達(dá)24-25
• 3.5 Western blotting檢測(cè)Caspase 3 蛋白表達(dá)25-26
• 3.6 Cathepsin L與p-Akt相關(guān)分析26-29
• 第4章 討論29-37
• 4.1 動(dòng)物模型評(píng)價(jià)29
• 4.2 溶酶體與缺血再灌注損傷29-30
• 4.3 Caspase 3 與凋亡30-31
• 4.4 Cathepsin L與缺血再灌注損傷31-33
• 4.5 p-Akt與缺血再灌注損傷33-34
• 4.6 展望34-37
• 第5章 結(jié)論37-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 附錄45-47
• 綜述47-55
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果55-57
• 致謝57

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本文編號(hào)：624691