發(fā)布時(shí)間：2017-08-03 14:26

  本文關(guān)鍵詞：Syndecan-1沉默抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲及其潛在機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 膠質(zhì)瘤 多配體蛋白多糖-1 增殖和侵襲 c-src/FAK

【摘要】：目的分析多配體蛋白多糖-1(Syndecan-1,SDC1)的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別及膠質(zhì)瘤患者生存率的關(guān)系;檢測SDC1在不同膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中的表達(dá)水平,探討SDC1沉默對(duì)A172和U87膠質(zhì)母細(xì)胞增殖和侵襲的影響及其機(jī)制;皮下成瘤實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SDC1的沉默對(duì)膠質(zhì)瘤增殖和侵襲的影響。方法1.利用The Cancer Genome Atlas(TCGA)和the National Center for Biotechnology Information Gene Expression Omnibus(NCBI-GEO)數(shù)據(jù)庫,通過R數(shù)據(jù)包分析SDC1的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的病理級(jí)別及膠質(zhì)瘤患者生存率的關(guān)系;2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot分析SDC1在不同膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中的表達(dá)水平;構(gòu)建SDC1穩(wěn)定沉默的A172和U87細(xì)胞株,轉(zhuǎn)染SDC1-sh RNA序列的細(xì)胞株為干擾組(sh SDC1),轉(zhuǎn)染scramble序列者為空白對(duì)照組(Scramble),未轉(zhuǎn)染者為陰性對(duì)照組(Control);3.采用MTT法、臺(tái)盼藍(lán)拒然法、流式細(xì)胞術(shù)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)分析SDC1的沉默對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響,qRT-PCR和Western Blot檢測SDC1及相關(guān)蛋白的表達(dá);4.Western Blot探討SDC1沉默抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲的潛在機(jī)制;5.皮下成瘤實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SDC1沉默對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞體內(nèi)成瘤的影響。結(jié)果1、TCGA和NCBI-GEO的數(shù)據(jù)分析顯示:膠質(zhì)瘤中SDC1表達(dá)隨著膠質(zhì)瘤病理級(jí)別的增加而表達(dá)增強(qiáng)(P0.0001);SDC1的表達(dá)超過平均表達(dá)水平2/3的膠質(zhì)瘤患者生存率明顯低于其表達(dá)低于平均水平1/3的膠質(zhì)瘤患者(P=0);2、qRT-PCR和Western blot顯示SDC1高表達(dá)于細(xì)胞株U87和A172細(xì)胞中,低表達(dá)于細(xì)胞株U251和SHG-44(P0.05);成功構(gòu)建穩(wěn)定沉默SDC1的A172和U87膠質(zhì)母細(xì)胞細(xì)胞株,qRT-PCR和Western blot顯示SDC1的表達(dá)在干擾組中顯著下降(P0.01);3、MTT實(shí)驗(yàn)、生長曲線和平板克隆實(shí)驗(yàn)顯示SDC1的沉默抑制A172和U87細(xì)胞的增殖(P0.05);流式細(xì)胞檢測顯示,A172和U87干擾組中細(xì)胞增殖率(30.84%±3.41%和35.64%±5.24%)較陰性組(47.76%±0.39%和47.20%±0.92%)和空白組(50.02%±3.39%和45.69%±1.44%)相比明顯下降(P0.01);Transwell小室實(shí)驗(yàn)顯示,A172和U87細(xì)胞干擾組中細(xì)胞遷移力(58.40±5.24vs255.8±16.09,226.5±22.84和138.1±3.21vs 319.0±10.91,307.8±8.83,P0.01)和侵襲力(61.67±16.26 vs 233.7±17.24,244.3±28.15和840.7±48.64 vs1400±53.84,1416±98.33,P0.01)也明顯降低;qRT-PCR和Western blot顯示干擾組PCNA和MMP-9表達(dá)明顯降低(P0.01);4、與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組相比,干擾組中c-src Tyr 416和FAK Tyr 397磷酸化程度在A172干擾組中下降1.61倍和2.21倍,U87中下降1.78倍和1.5倍(P0.05);c-src/FAK復(fù)合物下游信號(hào)Erk,p-38mapk和Akt的磷酸化程度,在A172干擾組中下降2.16倍,3.55倍和1.48倍,在U87細(xì)胞中為2.07倍,2.80倍和1.71倍(P0.05);5、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)顯示,干擾組和對(duì)照組的腫瘤體積分別為830±500mm3和4800±1530 mm3(P0.05);腫瘤在干擾組和對(duì)照組中的平均質(zhì)量分別為0.89±0.34 g vs 2.30±1.05 g(P0.05);兩組裸鼠的體重?zé)o明顯差異;免疫組化實(shí)驗(yàn)顯示干擾組中SDC1表達(dá)強(qiáng)度降低,血管密度降低。結(jié)論1、膠質(zhì)瘤中SDC1表達(dá)增強(qiáng)與腫瘤等級(jí)及不良預(yù)后密切相關(guān);體外實(shí)驗(yàn)顯示SDC1的沉默抑制膠質(zhì)瘤的增殖,侵襲和遷移;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示SDC1的沉默抑制膠質(zhì)瘤的皮下成瘤的增殖和惡性進(jìn)展;2、SDC1的沉默可能通過下調(diào)c-src/FAK復(fù)合物的活性抑制A172和U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞的integrinαⅤβ3/αⅤβ5信號(hào)通路,有望成為膠質(zhì)瘤生物治療的新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 多配體蛋白多糖-1 增殖和侵襲 c-src/FAK
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 1 材料和方法14-23
• 2 結(jié)果23-38
• 3 討論38-41
• 4 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 文獻(xiàn)綜述47-59
• 參考文獻(xiàn)52-59
• 致謝59-60
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 姜華,周幽心,邵忠,傅軍,黃煜倫,葉明;Syndecan-1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年01期

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本文編號(hào)：614833