本文關(guān)鍵詞：自噬對(duì)Hemin所致神經(jīng)元損傷的作用及其相關(guān)機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 自噬 凋亡 神經(jīng)元細(xì)胞 腦出血

【摘要】：目的:腦出血后自噬激活對(duì)神經(jīng)元損傷的影響尚不明晰,可能在某種特定條件下表現(xiàn)出促生存或促死亡的不同作用。本研究旨在以氯高鐵血紅素Hemin誘導(dǎo)的神經(jīng)元細(xì)胞損傷作為腦出血體外模型,通過(guò)直接調(diào)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞自噬水平,探究自噬對(duì)于的作用極其相關(guān)機(jī)制,并進(jìn)一步探究腦出血條件下自噬與凋亡間的相互調(diào)節(jié)的關(guān)系。方法:運(yùn)用原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)原代神經(jīng)元細(xì)胞,以適量濃度的Hemin誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷作為腦出血的體外模型,利用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)(10mM)及mTOR抑制劑雷帕霉素(Rapamycin,RAP)(100nM)干預(yù)腦出血后神經(jīng)元的自噬水平,使用熒光染料碘化丙啶(Propidium iodide,PI)標(biāo)記死亡細(xì)胞并計(jì)算細(xì)胞死亡率,應(yīng)用CCK-8試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞生存率,應(yīng)用Western Blot(WB)半定量檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白:LC3,p62/SQSTM1(p62)及Beclin1的表達(dá)水平;以及凋亡相關(guān)蛋白:cleaved-Caspase3的表達(dá)水平。免疫熒光檢測(cè)自噬、凋亡相關(guān)蛋白在神經(jīng)元細(xì)胞原位表達(dá)的水平。結(jié)果:(1)經(jīng)改進(jìn)的小鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元的原代培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)出的細(xì)胞生長(zhǎng)狀況良好,純度高,過(guò)程簡(jiǎn)便,是神經(jīng)科學(xué)研究中建立體外模型的好載體;神經(jīng)元原代細(xì)胞培養(yǎng)成功后,經(jīng)CCK-8實(shí)驗(yàn)評(píng)估細(xì)胞生存率和PI/MAP2評(píng)估神經(jīng)元死亡率,確定Hemin劑量50μmol/L,給藥6小時(shí),可作為本研究中建立腦出血體外模型的給藥方案。(2)PI染色結(jié)果顯示:Hemin作用后神經(jīng)元死亡數(shù)量增加,自噬抑制劑3-MA能夠顯著減少(p0.05)神經(jīng)元死亡而自噬激動(dòng)劑RAP能夠顯著增加(p0.01)神經(jīng)元死亡率。(3)WB及免疫熒光結(jié)果顯示:經(jīng)自噬抑制劑3-MA預(yù)處理的神經(jīng)元細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平顯著降低(p0.05)而凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)顯著增加(p0.05);于此相對(duì)應(yīng)的,經(jīng)自噬激動(dòng)劑RAP預(yù)處理的神經(jīng)元細(xì)胞的自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平顯著增加(p0.05)而凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)顯著降低(p0.05)。結(jié)論:(1)經(jīng)改進(jìn)的小鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元的原代培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)出的細(xì)胞生長(zhǎng)狀況良好,純度高,過(guò)程簡(jiǎn)便,是神經(jīng)科學(xué)研究中建立體外模型的好載體;(2)PI/MAP2評(píng)估神經(jīng)元死亡率可消除原代神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)中非神經(jīng)元細(xì)胞的干擾,Hemin劑量50μmol/L作用6小時(shí),可作為建立小鼠腦出血體外模型的最佳策略;(3)促進(jìn)自噬可增加Hemin所致神經(jīng)元損傷,抑制自噬能夠減少Hemin所致神經(jīng)元損傷;(4)自噬對(duì)Hemin所致神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：自噬 凋亡 神經(jīng)元細(xì)胞 腦出血
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R743.34
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 第一部分 小鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞原代培養(yǎng)及體外腦出血模型的建立11-19
• 第一節(jié) 小鼠腦皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞的原代培養(yǎng)11-14
• 第二節(jié)體外腦出血模型的建立14-18
• 小結(jié)18-19
• 第二部分 自噬對(duì)Hemin誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡的影響19-39
• 第一節(jié) 自噬對(duì)于Hemin誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷后的PI陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量的影響19-22
• 第二節(jié) 3-MA對(duì)Hemin誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷后自噬及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響22-34
• 第三節(jié) 雷帕霉素對(duì)于Hemin誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷后自噬及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響34-38
• 小結(jié)38-39
• 討論39-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 不足與展望48-49
• 綜述49-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 中英文對(duì)照縮略詞表57-58
• 攻讀碩士期間公開(kāi)發(fā)表的論文58-59
• 致謝59-60

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