本文關(guān)鍵詞：組蛋白乙�；窴AT8在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖中的作用及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 組蛋白乙酰化酶KAT8 細(xì)胞增殖 表皮生長因子EGFR 腫瘤發(fā)生

【摘要】：膠質(zhì)瘤是最常見也是最致命的惡性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤。其最大特點(diǎn)是具備強(qiáng)侵略性,能較輕易的侵入到周圍正常的腦組織。臨床治療的外科手術(shù)無法完全切除腫瘤組織,同時外科手術(shù)后殘留的腫瘤細(xì)胞可能會受到刺激形成脫離瘤體,進(jìn)一步增加膠質(zhì)母細(xì)胞瘤在正常腦組織中的侵襲程度。雖然目前神經(jīng)外科手術(shù)技術(shù)有很大提高以及化療、放療和綜合治療以及生物治療手段得以應(yīng)用,但是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的存活期仍然為得到明顯增加。對于現(xiàn)階段膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療效果不佳的情況,我們將主要探究膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞在體外和小鼠模型中的增殖的機(jī)制,期望能抑制膠質(zhì)母細(xì)胞的增殖,促使腫瘤組織只存在一定范圍;從而為外科手術(shù)治療徹底去除瘤體并規(guī)避正常腦組織,從而為進(jìn)一步的放療和化療提供幫助。KAT8是HAT中的一種屬于MYST家族的一個重要成員。其結(jié)構(gòu)除了包含HAT結(jié)構(gòu)域外還具有染色質(zhì)區(qū)域和高度保守的MYST結(jié)構(gòu)域,該結(jié)構(gòu)域由輔酶CoA結(jié)合位點(diǎn)、染色質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)和C2HC型鋅指結(jié)構(gòu)域組成。KAT8最初被命名為Mof,被確定在果蠅體內(nèi)作為劑量補(bǔ)償?shù)囊徊糠�。KAT8除了可以使組蛋白H4K16位點(diǎn)乙�；瘡亩够虺磉_(dá)外,還可使P53的K120位點(diǎn)乙�；５侥壳盀橹苟喾N實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示KAT8在胚胎形成和發(fā)育中扮演重要角色。本文初步研究了KAT8在膠質(zhì)母瘤細(xì)胞增殖中的作用以及可能的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明KAT8基因在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U87、A172、LN229中均有較顯著的表達(dá)。利用慢病介導(dǎo)的shRNA干涉系統(tǒng)對KAT8基因表達(dá)下調(diào),并通過qRT-PCR與Western blot技術(shù)檢測基因下調(diào)情況。在干涉KAT8的U87、A172和LN229細(xì)胞系中利用MTT、BrdU標(biāo)記技術(shù)檢測細(xì)胞增殖情況,結(jié)果顯示細(xì)胞的增殖受到明顯的抑制,同時使用流式細(xì)胞儀檢測到細(xì)胞周期阻滯在G2期,并伴隨相應(yīng)周期蛋白的表達(dá)下調(diào)。通過建立荷瘤小鼠模型檢測KAT8在個體水平中對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖和成瘤能力的影響。同時對小鼠腫瘤進(jìn)行HE、IHC、Western等檢測,發(fā)現(xiàn)在干涉的細(xì)胞形成的腫瘤的明顯的下降,同時相對應(yīng)的KAT8以及Ki67兩個基因的表達(dá)也收到抑制。在shRNA的干涉體系實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)EGFR信號通路受到抑制,在Western檢測發(fā)現(xiàn)EGFR/AKT/ERK信號通路呈關(guān)聯(lián)性。進(jìn)一步通過對KAT8在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中進(jìn)行過表達(dá),檢測發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖與成瘤能力有明顯的提高。同時EGFR/AKT/ERK信號通路中的三種磷酸化水平有明顯的提高。為了確認(rèn)KAT8是通過調(diào)控EGFR/AKT/ERK信號通路來調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的增殖、成瘤以及侵襲。在細(xì)胞培養(yǎng)時使用EGFR抑制劑Erlotinid,并通過Western檢測相關(guān)基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn)KAT8基因是通過對EGRF/AKT/ERK通路進(jìn)行調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖與侵襲。從而初步確定了KAT8是通過介導(dǎo)表皮生長因子EGFR信號通路的激活調(diào)節(jié)來對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 組蛋白乙�；窴AT8 細(xì)胞增殖 表皮生長因子EGFR 腫瘤發(fā)生
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1.1 蛋白質(zhì)乙�；�12
• 1.2 組蛋白乙�；c染色質(zhì)調(diào)控12-13
• 1.3 組蛋白乙酰化酶13-15
• 1.3.1 HAT B14
• 1.3.2 HAT A14-15
• 1.4 KATs與癌癥15-21
• 1.4.1 Gcn516
• 1.4.2 PCAF16-17
• 1.4.3 CBP/p30017-19
• 1.4.4 Tip6019-21
• 第二章 引言21-25
• 2.1 研究背景及意義21-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和技術(shù)路線22-25
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容22-23
• 2.2.2 技術(shù)路線23-25
• 第三章 KAT8在惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)25-37
• 3.1 材料與儀器試劑25-26
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料25
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器25-26
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑26
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法26-34
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)26-30
• 3.2.2 實(shí)時熒光定量PCR30-32
• 3.2.3 Western Blot32-34
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析34-35
• 3.3.1 惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞中KAT8的蛋白和mRNA表達(dá)34-35
• 3.4 討論與小結(jié)35-37
• 第四章 KAT8對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及腫瘤形成能力的影響37-55
• 4.1 材料與儀器試劑37-38
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料37
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器37-38
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑38
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法38-48
• 4.2.1 干涉載體的構(gòu)建38-40
• 4.2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染40-42
• 4.2.3 Western-blot42-44
• 4.2.4 MTT法測生長曲線44
• 4.2.5 Brd U標(biāo)記熒光染色44-45
• 4.2.6 軟瓊脂單克隆形成檢測45-46
• 4.2.7 小鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)的檢測46-47
• 4.2.8 免疫組織化學(xué)47-48
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析48-53
• 4.3.1 KAT8對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖能力48-50
• 4.3.2 KAT8對惡性膠質(zhì)瘤單克隆形成能力的影響50-51
• 4.3.3 KAT8對惡性膠質(zhì)瘤體內(nèi)成瘤能力的影響51-53
• 4.4 結(jié)果與討論53-55
• 第五章 KAT8對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞細(xì)胞周期的調(diào)控55-65
• 5.1 材料與儀器試劑55-56
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料55
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器55
• 5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑55-56
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法56-59
• 5.2.1 細(xì)胞周期檢測56-57
• 5.2.2 Western-blot57-59
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析59-62
• 5.3.1 降低KAT8表達(dá)會使細(xì)胞周期阻滯在G2期59-61
• 5.3.2 KAT8對EGFR信號通路的影響61
• 5.3.3 在腫瘤中KAT8也對EGFR信號通路影響61-62
• 5.4 結(jié)果討論62-65
• 第六章 KAT8調(diào)控惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制研究65-75
• 6.1 材料與儀器試劑65-66
• 6.1.1 實(shí)驗(yàn)材料65
• 6.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器65
• 6.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑65-66
• 6.2 試驗(yàn)方法66-71
• 6.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)66-68
• 6.2.2 Western-blot68-70
• 6.2.3 MTT法測生長曲線70
• 6.2.4 小鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)的檢測70-71
• 6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析71-73
• 6.3.1 KAT8對惡性膠質(zhì)瘤的調(diào)控有EGFR參與71-72
• 6.3.2 EGFR確為KAT8的下游信號通路72-73
• 6.4 結(jié)果討論73-75
• 第七章 全文總結(jié)75-79
• 7.1 組蛋白乙�；窴AT8在膠質(zhì)瘤中普遍存在75
• 7.2 組蛋白乙酰化酶KAT8對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及腫瘤形成能力的影響75-76
• 7.3 組蛋白乙�；窴AT8對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期的調(diào)控76
• 7.4 EGFR是組蛋白乙�；窴AT8的下游效應(yīng)信號通路76-77
• 7.5 討論77-79
• 參考文獻(xiàn)79-85
• 縮略詞表85-87
• 碩士在讀期間發(fā)表的文章及參研課題情況87-89
• 致謝89

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本文編號：517400