本文關(guān)鍵詞：Homer1a在小鼠腦缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：缺血性腦損傷是臨床上常見(jiàn)疾病,在世界人口死亡疾病譜中排名第二,嚴(yán)重威脅著人類健康。根據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)告,每年約有570萬(wàn)人因該疾病致殘、致死,給社會(huì)和家庭造成沉重經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。該疾病的發(fā)病原因主要是腦組織供血中斷,短時(shí)間內(nèi)不能恢復(fù)血供引起。在臨床上,早期溶栓恢復(fù)血供是其基本治療策略。然而,研究認(rèn)為,人腦在缺血超過(guò)4.5h后,雖然恢復(fù)血供,但可激發(fā)細(xì)胞產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)引起缺血后的再灌注損傷。遺憾的是臨床上患者的治療絕大多數(shù)已經(jīng)錯(cuò)過(guò)這一時(shí)間窗,因此常見(jiàn)的缺血性腦損傷多數(shù)為再灌注損傷。目前有關(guān)腦缺血再灌注損傷的致病機(jī)制主要有氨基酸興奮性毒性、自由基損傷、鈣離子超載、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等各種病理機(jī)制學(xué)說(shuō)。深入研究這些發(fā)病機(jī)及干預(yù)策略成為治療腦缺血再灌注損傷急需解決的問(wèn)題。近年研究發(fā)現(xiàn),一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)突觸后膜骨架蛋白—Homer蛋白在許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要作用。作為突觸后膜骨架蛋白,Homer蛋白是參與突觸構(gòu)成及介導(dǎo)神經(jīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用的一類關(guān)鍵蛋白分子。其中,研究最為廣泛的是Homer1蛋白。通過(guò)即早型基因和構(gòu)成型基因的不同編碼表達(dá),Homer1主要分為Homer1a和Homer1b/c兩種蛋白。Homer1a蛋白屬于即早基因表達(dá),生理?xiàng)l件下幾乎不表達(dá),神經(jīng)元細(xì)胞損傷或者被刺激后啟動(dòng)快速表達(dá),而Homer1b/c蛋白則屬于構(gòu)成型蛋白,在體內(nèi)常規(guī)表達(dá)。兩種蛋白在功能上相互具有拮抗性調(diào)節(jié)作用。因Homer1蛋白可以調(diào)節(jié)突觸后膜受體叢集、細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài),形成連接復(fù)合體等作用,臨床前實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)暗示Homer1蛋白與許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)。在前人實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn),顱腦創(chuàng)傷性損傷、細(xì)胞氧糖剝奪模型損傷中均可發(fā)現(xiàn)Homer1a蛋白早期快速高表達(dá),而Homer1b/c蛋白恒定表達(dá)。并且深入研究發(fā)現(xiàn),這種高表達(dá)的Homer1a蛋白可以通過(guò)負(fù)性調(diào)節(jié)并拆解Homer1b/c蛋白參與形成的各種蛋白復(fù)合體,從而抑制諸如興奮性氨基酸毒性、細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載等損傷而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。因此我們猜測(cè),在腦缺血再灌注損傷中,可能同樣存在該種作用機(jī)制,而這種研究在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中卻未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)的目的是期望應(yīng)用Homer1a基因敲除小鼠,敲除Homer1a蛋白表達(dá),從而在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中明確Homer1a在腦缺血再灌注損傷中的作用,以及初步探索該作用的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)一Homer1a基因敲除小鼠的繁殖培育與基因鑒定目的:繁殖培育及鑒定Homer1a基因敲除小鼠。方法:通過(guò)應(yīng)用由美國(guó)約翰霍普金斯大學(xué)Paul F.Worley教授贈(zèng)送的Homer1a基因敲除種鼠進(jìn)行配對(duì)繁殖,并通過(guò)鼠尾提取基因組進(jìn)行PCR及凝膠電泳鑒定子鼠基因型。結(jié)果:共繁殖培育子鼠142只,其中野生型小鼠42只,雜合子型小鼠79只,Homer1a基因敲除純合子小鼠21只。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,成功繁殖并鑒定出野生型及基因敲除型小鼠,為后續(xù)試驗(yàn)提供了可靠的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源。實(shí)驗(yàn)二Homer1a在小鼠局灶性缺血再灌注腦損傷中的保護(hù)作用及對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化影響目的:通過(guò)比較Homer1a基因敲除小鼠與野生型小鼠,明確Homer1a蛋白在小鼠腦缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用,及對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。方法:取雄性Homer1a基因敲除(Knock Out,KO)小鼠及同窩野生型(Wild Type,WT)小鼠,分為基因敲除假手術(shù)組(Sham Knock Out,SKO)、野生型假手術(shù)組(Sham Wild Type,SWT)、基因敲除缺血再灌注損傷模型組(Model Knock Out,MKO),野生型缺血再灌注損傷模型組(Model Wild Type,MWT)四組,進(jìn)行m NSS行為學(xué)檢測(cè)、HE染色觀察腦組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)、TTC腦梗死體積百分比計(jì)算、TUNE凋亡檢測(cè)及GFAP熒光染色。結(jié)果:可以通過(guò)HE染色觀察到梗死區(qū)細(xì)胞水腫、崩解、細(xì)胞稀疏,核固縮等。小鼠腦缺血再灌注損傷后,比較Homer1a基因敲除小鼠與野生型小鼠發(fā)現(xiàn),基因敲除小鼠行為學(xué)損傷加重、腦梗死體積百分比升高、細(xì)胞凋亡率增高。腦缺血再灌注損傷后,小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)升高,然而Homer1a基因敲除小鼠GFAP免疫熒光染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較野生型組少。結(jié)論:敲除Homer1a基因后,可加重小鼠腦缺血再灌注損傷,說(shuō)明Homer1a蛋白在腦缺血再灌注損傷中具有保護(hù)作用。Homer1a基因敲除降低了星形膠質(zhì)細(xì)胞活化,提示,星形膠質(zhì)細(xì)胞可能參與并發(fā)揮復(fù)雜作用。
【關(guān)鍵詞】：Homer la 基因敲除 腦缺血再灌注損傷 星形膠質(zhì)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-28
• 實(shí)驗(yàn)一 Homer1a基因敲除小鼠的繁殖培育與基因鑒定28-35
• 1 材料28-29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29-32
• 3 結(jié)果32-33
• 4 討論33-35
• 實(shí)驗(yàn)二 Homer1a在小鼠局灶性缺血再灌注腦損傷中的保護(hù)作用及對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化影響35-55
• 一 小鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型建立35-41
• 1 材料35-36
• 2 實(shí)驗(yàn)方法36-38
• 3 結(jié)果38-40
• 4 討論40-41
• 二 Homer1a在腦缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用及對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化影響41-55
• 1 材料42-44
• 2 實(shí)驗(yàn)方法44-47
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析47
• 4 結(jié)果47-52
• 5 討論52-55
• 小結(jié)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-65
• 附錄65-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果66-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 孫允霄;冉煥英;賈秀紅;王建明;李有杰;;丙戊酸鈉對(duì)癲癇大鼠海馬組織中Homer1a、mGluR5表達(dá)的影響[J];中國(guó)兒童保健雜志;2013年09期

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  本文關(guān)鍵詞：Homer1a在小鼠腦缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：458435