目的:探討Rho/ROCK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在重癥肌無力(MG)患者中的作用。方法:收集34例MG患者和25例健康正常人外周血標(biāo)本,獲取人外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)進(jìn)行體外培養(yǎng)。以不同濃度ROCK抑制劑鹽酸法舒地爾(HF)處理MG患者PBMCs,并觀察其對細(xì)胞活力的影響。蛋白免疫印跡(Western bloting)法檢測ROCK-2的蛋白表達(dá);實時熒光定量PCR(qPCR)和酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測白細(xì)胞介素(IL)-17A、IL-23、IL-22在PBMCs中mRNA和細(xì)胞上清液中的蛋白表達(dá)。結(jié)果:與健康對照組相比,MG患者的ROCK-2蛋白表達(dá)升高(P<0.01),PBMCs中IL-17A mRNA、IL-23 mRNA水平和蛋白水平均升高(P<0.05,P<0.01)。使用HF阻斷Rho/ROCK信號通路后顯著下調(diào)MG患者PBMCs的IL-17A mRNA、IL-23mRNA表達(dá)(P<0.05,P<0.05)以及蛋白水平(P<0.05,P<0.01)。IL-22 mRNA水平及蛋白表達(dá)水平未見明顯改變(P>0.05)。結(jié)...

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【文章目錄】：
1 對象與方法
    1.1 研究對象
    1.2 材料與方法
        1.2.1 實驗試劑
        1.2.2 主要試劑配置
        1.2.3 密度梯度離心法分離PBMCs
        1.2.4 HF對PBMCs細(xì)胞活力影響的檢測
        1.2.5 蛋白免疫印跡（Western bloting）法檢測PBMCs細(xì)胞中ROCK-2蛋白的表達(dá)量
        1.2.6 實驗分組及處理
        1.2.7 實時熒光定量PCR(q PCR）法檢測各組PBMCs中IL-17A m RNA、IL-22 m RNA、IL-23m RNA表達(dá)
        1.2.8 PBMCs細(xì)胞上清液IL-17A、IL-22、IL-23A水平檢測
    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 不同濃度HF對PBMCs活力的影響
    2.2 PBMCs中ROCK-2蛋白水平
    2.3 抑制ROCK信號傳導(dǎo)后PBMCs的IL-17A m RNA、IL-22 m RNA、IL-23 m RNA水平
    2.4 抑制ROCK信號傳導(dǎo)后PBMCs細(xì)胞的IL-17A、IL-22、IL-23蛋白水平
3 討論



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