本研究以帕金森(PD)和腦缺血損傷模型為例,采用原代皮層純星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系、皮層或中腦純神經(jīng)元培養(yǎng)體系以及中腦神經(jīng)元-星形膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)體系作為研究對(duì)象,探討梓醇和PBEF在神經(jīng)退行性疾病中的保護(hù)作用和機(jī)理,主要內(nèi)容如下： 1.梓醇的神經(jīng)保護(hù)作用 梓醇在純星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系中的神經(jīng)保護(hù)作用。一方面,采用H202誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,結(jié)果發(fā)現(xiàn),梓醇能夠明顯提高細(xì)胞活力,減少細(xì)胞內(nèi)ROS的形成。此外,梓醇還通過(guò)增強(qiáng)谷胱甘肽還原酶(GR)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)等谷胱甘肽代謝循環(huán)中關(guān)鍵酶的活性以及降低氧化型谷胱甘肽(GSSG)在總谷胱甘肽(GSx)中的比例,從而抑制H202誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷。但是,梓醇對(duì)過(guò)氧化氫酶(CAT)活性的增強(qiáng)作用卻并不明顯,說(shuō)明梓醇在此損傷模型中潛在的保護(hù)機(jī)制主要是增強(qiáng)谷胱甘肽代謝循環(huán)效率以及抑制ROS生成。另一方面,采用脂多糖(LPS)與干擾素-Y(IFN-Y)共同刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥反應(yīng),結(jié)果表明,梓醇顯著抑制了一氧化氮(NO)和ROS的生成,削弱了誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。此外,梓醇還明顯下調(diào)了相關(guān)炎癥基因iNOS...

【文章頁(yè)數(shù)】：131 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1. 文獻(xiàn)綜述
    1.1 帕金森綜合癥概述
        1.1.1 PD的致病機(jī)制
        1.1.2 PD的預(yù)防與治療措施
        1.1.3 PD模型的構(gòu)建
    1.2 腦缺血缺氧損傷的概述
        1.2.1 腦缺血的致病機(jī)制
        1.2.2 腦缺血損傷模型的構(gòu)建
    1.3 星形膠質(zhì)細(xì)胞概述
        1.3.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞的特性
        1.3.2 星形膠質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)功能
        1.3.3 星形膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元之間的相互作用
        1.3.4 星形膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元之間的谷氨酸-谷氨酰胺代謝偶聯(lián)
        1.3.5 星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活與炎癥反應(yīng)
    1.4 NAD、NAM和PBEF的研究概況
        1.4.1 NAD的合成與代謝過(guò)程
        1.4.2 PBEF的生物學(xué)功能
    1.5 梓醇的研究概況
        1.5.1 梓醇的理化性質(zhì)
        1.5.2 梓醇的藥理活性
    1.6 選題依據(jù)
2. 梓醇在純星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系中的神經(jīng)保護(hù)作用
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠皮層純星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)染色
        2.2.3 細(xì)胞活力測(cè)定
        2.2.4 ROS含量測(cè)定
        2.2.5 GSx與GSSG含量測(cè)定
        2.2.6 GR活性測(cè)定
        2.2.7 GSH-Px活性測(cè)定
        2.2.8 CAT活性測(cè)定
        2.2.9 NO含量和iNOS活性測(cè)定
        2.2.10 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)
        2.2.11 NF-KB表達(dá)的測(cè)定
        2.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 梓醇對(duì)H202誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用
            2.3.1.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察
            2.3.1.2 H202最佳損傷濃度的篩選
            2.3.1.3 梓醇對(duì)H202誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
            2.3.1.4 梓醇對(duì)H202誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞ROS生成的影響
            2.3.1.5 梓醇對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞GSx與GSSG含量的影響
            2.3.1.6 梓醇對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞GR、GSH-Px和CAT活性的影響
        2.3.2 梓醇對(duì)LPS+IFN-Y誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞激活的抑制作用
            2.3.2.1 梓醇對(duì)LPS+IFN-Y誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞激活的形態(tài)學(xué)影響
            2.3.2.2 梓醇對(duì)LPS+IFN-Y誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞NO生成和iNOS活性的影響
            2.3.2.3 梓醇對(duì)LPS+IFN-Y誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞ROS生成的影響
            2.3.2.4 梓醇對(duì)LPS+IFN-Y誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響
            2.3.2.5 梓醇對(duì)LPS+IFN-Y誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞NF-KB活性的影響
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3. 梓醇在中腦純神經(jīng)元培養(yǎng)體系中的神經(jīng)保護(hù)作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 小鼠中腦純神經(jīng)元的培養(yǎng)
        3.2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)分析
        3.2.3 Hoechst 33258染色
        3.2.4 流式細(xì)胞儀分析凋亡與壞死
        3.2.5 NO含量測(cè)定
        3.2.6 免疫印記(Western Blotting)
        3.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 梓醇對(duì)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的中腦多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用
        3.3.2 梓醇對(duì)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的中腦神經(jīng)元凋亡與壞死的影響
        3.3.3 梓醇對(duì)魚(yú)藤酮誘導(dǎo)的中腦神經(jīng)元NO生成和iNOS表達(dá)的影響
        3.3.4 梓醇對(duì)魚(yú)藤酮介導(dǎo)的JNK和ERK信號(hào)通路的調(diào)控
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4. 梓醇在中腦神經(jīng)元-星形膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)體系中的神經(jīng)保護(hù)作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 小鼠中腦神經(jīng)元.星形膠質(zhì)細(xì)胞混合培養(yǎng)
        4.2.2 細(xì)胞活力與LDH的測(cè)定
        4.2.3 細(xì)胞線粒體提取
        4.2.4 ROS含量測(cè)定
        4.2.5 線粒體膜電位(MMP)的測(cè)定
        4.2.6 線粒體復(fù)合物I活性測(cè)定
        4.2.7 線粒體通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔(MPTp)開(kāi)放度的測(cè)定
        4.2.8 細(xì)胞內(nèi)鈣離子(Ca2+)測(cè)定
        4.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 梓醇對(duì)MPP+誘導(dǎo)的中腦神經(jīng)元損傷的的保護(hù)作用
        4.3.2 梓醇對(duì)MPP+誘導(dǎo)的線粒體功能紊亂的影響
        4.3.3 梓醇對(duì)MPP+誘導(dǎo)的ROS生成和Ca2+超載的影響
        4.3.4 梓醇對(duì)MPP+誘導(dǎo)的MPTp開(kāi)放的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5. PBEF在腦缺血缺氧損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 原代皮層神經(jīng)元的培養(yǎng)以及OGD模型的構(gòu)建
        5.2.2 細(xì)胞的存活與死亡測(cè)定
        5.2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)染色
        5.2.4 活細(xì)胞實(shí)時(shí)成像測(cè)定MMP
        5.2.5 細(xì)胞內(nèi)NAD+含量測(cè)定
        5.2.6 細(xì)胞內(nèi)ATP含量測(cè)定
        5.2.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        5.2.8 線粒體生物合成的測(cè)定
        5.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 外源NAD+與NAM對(duì)OGD及谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用
        5.3.2 外源NAD+與NAM對(duì)FK866引起的神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用
        5.3.3 FK866加劇OGD誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷與NAD+耗竭
        5.3.4 PBEF通過(guò)調(diào)節(jié)NAD+合成削弱神經(jīng)元損傷
        5.3.5 PBEF在正�；騉GD損傷條件下對(duì)細(xì)胞ATP水平的影響
        5.3.6 PBEF在損傷條件下對(duì)線粒體生物合成的影響
        5.3.7 PBEF在谷氨酸興奮性毒性損傷中對(duì)MMP的影響
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
結(jié)論與展望
    結(jié)論
    展望
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄 縮略詞表
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3827925