目的：探討前腦缺血再灌后星形膠質(zhì)細胞神經(jīng)酰胺(ceramide)特異性積累的分子機制以及對神經(jīng)元損傷的影響。 方法：采用成年清潔級雄性SD大鼠,建立四動脈阻斷前腦缺血再灌注模型,側腦室分別給予中性鞘磷脂酶2(N-SMase2) siRNA、control siRNA、N-SMase2活性抑制劑GW4869、TNFa受體抑制劑R-7050、p38MAPK抑制劑SB-203580、PP2B抑制劑、PKCδ抑制劑Rottlerin、A2bAR拮抗劑MRS-1754、N-SMase2激動劑柔紅霉素(DNR)。觀察中性鞘磷脂酶(N-SMase)、酸性鞘磷脂酶(A-SMase)及N-SMase2活性變化；免疫熒光或免疫組化檢測ceramide及相關蛋白神經(jīng)細胞定位；尼氏染色實驗觀察神經(jīng)元損傷情況；TUNEL實驗觀察神經(jīng)元凋亡變化；Western blot實驗評價N-SMase2、p38MAPK及p-p38MAPK蛋白水平變化；免疫共沉淀實驗檢測N-SMase2與RACK1、EED之間的結合作用：Realtime PCR測定IL-1β、IL-6、TNFα等前炎癥因子mRNA水平變化。同時采用體外分離...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    1. 實驗材料與試劑
        1.1 儀器設備
        1.2 試劑來源
    2. 研究方法
        2.1 實驗動物及大鼠腦缺血模型制作
        2.2 側腦室織藥物和siRNA
        2.3 大鼠原代星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)
        2.4 大鼠原代神經(jīng)元的培養(yǎng)
        2.5 氧戲糖剝脫模型(OGD)
        2.6 細胞共培養(yǎng)
        2.7 海馬組織蛋白提取
        2.8 蛋白濃度測定
        2.9 免疫印跡（Western blot)
        2.10 免疫共沉淀
        2.11 鞘磷脂海活性測定和特異性中性鞘磷脂酶2活性測定
        2.12 免疫突光及免疫組織化學
        2.13 尼氏染色
        2.14 TUNEL細胞調(diào)亡檢測法
        2.15 Real-time RT-PCR
        2.16 數(shù)據(jù)處理
結果
    1.前腦缺血誘導ceramide在海馬星形膠質(zhì)細胞而不是神經(jīng)元的特異性積累且與N-SMase激活密切相關
    2.前腦缺血誘導星形膠質(zhì)細胞中N-SMase2而不是A-SMase的快速激活
    3.腦缺血/再灌中N-SMase2激活參與了誘導神經(jīng)元損傷
    4.TNFaR/RACKl/EED通路部分介導了腦缺血N-SMase2的早期激活
    5.P38MAPK；誘導的N-SMase2磷酸化是腦缺血N-SMase2/ceramide途徑激活的重要機制
    6.AibAR調(diào)控了腦缺血P38MAPK剌激N-SMase2/ceramide途徑的撖活
    7.腦缺血/再灌中N-SMase2的瀲活剌撖了星形膠質(zhì)細胞炎癥因子的生成
    8.前腦缺血星形膠質(zhì)細胞ceramide積累誘導了周圍神經(jīng)元炎性次級損傷
實驗數(shù)據(jù)及英文注釋
討論
小結
參考文獻
附錄(一) 綜述
    參考文獻
附錄(二) 縮略詞表
附錄(三) 發(fā)表文章
致謝



本文編號：3822593