目的利用RNA干擾（RNAi）在人膠質(zhì)瘤U251和U87-MG細(xì)胞中沉默NOB1（NIN1/RPN12binding protein1homolog）基因的表達(dá)，探討NOB1對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖以及凋亡的影響。 方法利用免疫組化技術(shù)對(duì)56例不同級(jí)別人膠質(zhì)瘤組織中NOB1的表達(dá)及與病理分級(jí)相關(guān)性進(jìn)行分析。構(gòu)建NOB1基因的短發(fā)卡（shRNA）慢病毒表達(dá)載體，包裝成病毒顆粒，其中用綠色熒光蛋白（GFP）作為報(bào)告基因。將GFP慢病毒顆粒按照不同感染復(fù)數(shù)（MOI）感染不同膠質(zhì)瘤細(xì)胞（U251、U87-MG），48h后經(jīng)熒光鏡檢檢測(cè)GFP表達(dá)陽(yáng)性率以判定感染率，以此確定最優(yōu)MOI（感染復(fù)數(shù)）。將NOB1基因的shRNA慢病毒顆粒以?xún)?yōu)化的條件感染培養(yǎng)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞，在24h收集RNA樣本，36h收集蛋白樣本，通過(guò)real-time PCR與NOB1抗體的Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證siRNA對(duì)于NOB1基因的在mRNA和蛋白水平的沉默效率。在U87-MG、U251細(xì)胞利用優(yōu)化慢病毒感染條件，穩(wěn)定沉默NOB1基因，實(shí)驗(yàn)分為：空白對(duì)照，陰性對(duì)照，RNAi實(shí)驗(yàn)組三組，分別進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
摘要
Abstract
1 前言
2 材料與方法
3 結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
6 參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3793035