目的：1、揭示A2AR在實驗性自身免疫性重癥肌無力（ExperimentalAutoimmune Myasthenia Gravis，EAMG）發(fā)生、發(fā)展中的作用；2、證實A2AR是通過作用于EAMG病理性T細(xì)胞進(jìn)而影響EAMG的發(fā)病過程；3、探討激活A(yù)2AR調(diào)節(jié)EAMG疾病進(jìn)程的具體分子機(jī)制。 方法：1、通過主動免疫建立大鼠EAMG動物模型；2、組織病理學(xué)實驗技術(shù)檢測A2AR的表達(dá)和相關(guān)病理學(xué)改變；3、FACS方法檢測A2AR在CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和B細(xì)胞上的分布；4、體外加入A2AR激動劑CGS21680、A2AR拮抗劑SCH58261、ZM241385，cAMP拮抗劑H-89后ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中anti-AChR IgG的分泌情況、3H標(biāo)記技術(shù)檢測淋巴細(xì)胞增殖能力、FACS方法檢測Th1、Th2、Th17及Treg四種亞型的改變；5、免疫磁珠法分選細(xì)胞獲得B細(xì)胞加入CGS21680后ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中anti-AChR IgG的分泌情況、3H標(biāo)記技術(shù)檢測B淋巴細(xì)胞增殖能力；6、于一次免疫前一天和二次免疫前一天分別給予CGS21680，觀察老鼠...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中英文對照
中文摘要
Abstract
1、文獻(xiàn)綜述
    1.1 重癥肌無力簡介
        1.1.1 重癥肌無力
        1.1.2 實驗性自身免疫性重癥肌無力
        1.1.3 MG/EAMG 的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制
    1.2 腺苷 A2A 受體簡介
        1.2.1 腺苷
        1.2.2 腺苷受體
        1.2.3 腺苷 A2A 受體
        1.2.4 A2AR 治療自身免疫性疾病
        1.2.5 A2AR 的功能
2、前言
3、材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物及細(xì)胞
        3.1.2 儀器設(shè)備
        3.1.3 藥品與試劑
    3.2 主要試劑配制方法
        3.2.1 緩沖液
        3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)液
        3.2.3 免疫病理實驗用試劑
        3.2.4 免疫抗原
        3.2.5 流式所用試劑
        3.2.6 其它試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 EAMG 動物模型的建立及評定
        3.3.2 CGS21680 體內(nèi)給藥治療
        3.3.3 處死動物，組織取材
        3.3.4 淋巴細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.5 檢測 A2AR 在 EAMG 中的作用
        3.3.6 抗 AChR IgG 抗體的檢測
        3.3.7 ELISA 方法檢測血清及細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子分泌情況
        3.3.8 淋巴細(xì)胞增殖實驗
        3.3.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測
        3.3.10 磁珠分選 B 淋巴細(xì)胞
        3.3.11 免疫熒光法檢測神經(jīng)肌肉接頭處 AChR、C3 和 IgG 的變化情況
    3.4 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學(xué)檢驗
4、實驗結(jié)果
    4.1 EAMG 模型的建立
        4.1.1 臨床評分和體重
        4.1.2 EAMG 大鼠血清中的 anti-AChR IgG 檢測
        4.1.3 EAMG 大鼠神經(jīng)肌肉接頭處 AChR 缺失并且 IgG 和補(bǔ)體 C3 沉著
    4.2 檢測 A2AR 在 EAMG 中的表達(dá)
        4.2.1 EAMG 淋巴結(jié)和脾中的 A2AR 的表達(dá)
        4.2.2 A2AR 在 CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞和 B 細(xì)胞上的表達(dá)
    4.3 激活 A2AR 觀察 AChR 特異性淋巴細(xì)胞的變化
        4.3.1 激活 A2AR 后對 AChR 特異性淋巴細(xì)胞 anti-AChR IgG 分泌的影響
        4.3.2 激活 A2AR 后對 AChR 特異性淋巴細(xì)胞 anti-AChR IgG 分泌細(xì)胞的影響
        4.3.3 激活 A2AR 后對 AChR 特異性淋巴細(xì)胞增殖活性的影響
    4.4 體外激活 A2AR 后對 AChR 特異性 T 淋巴細(xì)胞和 B 淋巴細(xì)胞的影響
        4.4.1 激活 A2AR 后對 B 細(xì)胞增殖和抗體分泌的作用
        4.4.2 激活 A2AR 后能夠改變 Th 亞群的分布
    4.5 體內(nèi)激活 A2AR 后對 EAMG 發(fā)病的影響
        4.5.1 預(yù)防性體內(nèi)給藥實驗完全緩解 EAMG 的發(fā)病而治療性給藥部分緩解 EAMG 的發(fā)病過程
        4.5.2 治療性給藥和預(yù)防性給藥對于血清中 anti-AChR IgG 的影響和AChR 特異性淋巴細(xì)胞增殖能力的影響
        4.5.3 預(yù)防性給藥方案組能夠逆轉(zhuǎn) Th 細(xì)胞亞群失衡
5、討論
6、結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
個人簡歷



本文編號：3764919