本文關鍵詞：缺氧誘導因子1α與著絲粒蛋白W在人膠質瘤組織及細胞中表達的相關性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：神經膠質瘤起源于神經膠質細胞[1,2],是中樞神經系統中最常見、難治的原發(fā)性惡性腫瘤[3],大約占顱內腫瘤的一半[4]。既往有相關調查表明,神經膠質瘤的發(fā)生、發(fā)展和侵襲等過程都是多階段的、多種基因參與的結果[5],但是其中的具體機制至今尚不明了[5]。著絲粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)又稱腫瘤上調蛋白2(cancer-up-regulated gene 2,CUG2)基因,是2007年發(fā)現的一種致癌基因[7]。研究發(fā)現,CENP-W在卵巢、肝臟、肺、胰腺和結腸等惡性腫瘤組織中普遍存在高表達[8,9]。它的過表達既可以促進細胞的增殖,另一方面又可以誘導細胞的凋亡[10],具有很復雜的作用機制[11]。實驗證明,CENP-W的過表達可誘發(fā)腫瘤形成[12],與人體各種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和遷徙等過程有重要關系。缺氧誘導因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是缺氧環(huán)境誘導下細胞產生的一種核轉錄因子[13,14],可調控多種靶基因的表達[15],它在一般環(huán)境中很容易分解[16]。然而,目前CENP-W與HIF-1α在神經膠質瘤中的表達相關性尚未見相關報道。目的:本研究以Ⅰ~Ⅳ級神經膠質瘤組織、瘤旁腦組織和U251膠質細胞為實驗對象,檢測HIF-1α與CENP-W在神經膠質瘤組織及細胞中的表達及其相關性,探討它們與膠質瘤生物學行為的關系,以期為膠質瘤的防治提供一些依據。方法:第一部分應用免疫組織化學染色方法檢測41例含不同級別的膠質瘤組織標本、3例瘤旁腦組織標本中HIF-1α和CENP-W的表達水平,并統計學分析蛋白表達水平與膠質瘤臨床病理特征的關系,以及兩蛋白表達之間的相關性。第二部分應用不同濃度氯化鈷[17]抑制膠質瘤U251細胞中HIF-1α的分解,細胞培養(yǎng)48 h后采用實時熒光定量PCR法檢測CENP-W mRNA表達的變化,24h后采用蛋白質印跡法檢測細胞中C ENP-W蛋白的表達的變化,統計學分析結果,探索當HIF-1α含量升高時對U251細胞中CENP-W蛋白及mRNA表達的影響。第三部分應用特異性小干擾rna(smallinterferencerna,sirna)干擾u251細胞中hif-1α表達使其下調后,采用蛋白質印跡法和實時熒光定量pcr法分別檢測cenp-w蛋白及mrna表達的變化。應用特異性sirna干擾u251細胞中cenp-w表達使其下調后,采用蛋白質印跡法和實時熒光定量pcr法檢測hif-1α蛋白及mrna表達的變化,并用統計學方法分析結果,進一步探索u251細胞中hif-1α和cenp-w表達的相關性。結果:1.免疫組織化學檢測結果提示cenp-w主要表達于細胞核,有明顯的異質性,在瘤旁正常組織、低級別(Ⅰ~Ⅱ)和高級別(Ⅲ~Ⅳ)膠質瘤標本中其表達陽性率分別是67%(2/3)、82%(14/17)和92%(22/24),統計學分析顯示各組cenp-w表達率之間沒有明顯差異(χ2=1.794,p=0.408);但比較免疫組織化學評分發(fā)現,高級別組評分(3.58±1.06)普遍比低級別組(2.88±1.50)高,其中瘤旁組評分(2.00±2.00)最低。hif-1α主要表達于細胞核,高級別膠質瘤中有少量表達于細胞質,有明顯的異質性;在瘤旁正常組織、低級別和高級別膠質瘤標本中其表達陽性率分別是0%(0/3)、47%(8/17)和79%(19/24),各組表達陽性率之間差異有統計學意義(χ2=9.440,p=0.009)。另外,cenp-w和hif-1α在膠質瘤中的表達與患者性別、年齡及膠質瘤病理類型均沒有明顯的關系。2.氯化鈷模擬缺氧實驗結果顯示,當50μmol/l氯化鈷處理膠質瘤u251細胞24~48h后,細胞生長狀況和未經氯化鈷處理的細胞相比無明顯不同,顯微鏡下可見處理組細胞生長良好,同條件下細胞密度較高,細胞形態(tài)無明顯異常。實時熒光定量pcr結果顯示,50μmol/l氯化鈷處理u251細胞24h后,hif-1αmrna表達水平無明顯變化(t=1.965,p=0.08),cenp-wmrna表達水平升高(t=18.263,p0.01)。蛋白質印跡法檢測結果顯示,50μmol/l氯化鈷處理u251細胞48h后,hif-1α蛋白的表達水平明顯升高(t=10.271,p0.01),cenp-w蛋白表達水平也明顯升高(t=7.813,p0.01)。3.hif-1asirna轉染u251細胞36h后,實時熒光定量pcr結果顯示,轉染hif-1αsirna組hif-1αmrna表達水平較轉染陰性對照組(q=10.01,p0.01)和未轉染對照組(q=9.64,p0.01)明顯降低,cenp-wmrna表達水平也較明顯下降(q=9.95,p0.01;q=10.52,p0.01),2個對照組之間差異無統計學意義(P0.05)。轉染48 h后,轉染HIF-1αsiRNA組HIF-1α蛋白表達水平較2個對照細胞組明顯降低(q=6.95,P0.01;q=7.59,P0.01),CENP-W蛋白表達水平也相應下降(q=5.01,P0.05;q=5.82,P0.01),2個對照組之間差異亦無統計學意義(P0.05)。4.CENP-W siRNA轉染U251細胞36 h后,實時熒光定量PCR結果顯示,轉染CENP-W siRNA組CENP-W mRNA表達水平較轉染陰性對照組(q=9.43,P0.01)和未轉染對照組(q=8.95,P0.01)明顯降低;然而,HIF-1αmRNA表達水平在3組之間無明顯變化(P0.05)。轉染48 h后,轉染CENP-W siRNA組CENP-W蛋白表達水平較2個對照組明顯降低(q=5.74,P0.01,q=5.39,P0.05),而HIF-1α蛋白表達水平無明顯變化(q=2.95,q=2.64,P0.05)。結論:1.以瘤旁腦組織做為對照,HIF-1α和CENP-W在膠質瘤標本均存在高表達,與腫瘤級別呈正相關,且HIF-1α和CENP-W在膠質瘤標本中的表達呈一定的相關性,提示HIF-1α和CENP-W可能共同參與了膠質瘤的發(fā)生與發(fā)展。2.應用氯化鈷模擬缺氧實驗,成功證明當U251細胞中HIF-1α適量積聚時,細胞中CENP-W的表達也升高,表明HIF-1α可能調節(jié)U251細胞CENP-W的表達。3.HIF-1αsiRNA轉染U251細胞后CENP-W的表達也隨之降低,進一步表明HIF-1α可能調節(jié)U251細胞CENP-W的表達。4.CENP-W siRNA轉染U251細胞后HIF-1α的表達無明顯改變,提示U251細胞中CENP-W對HIF-1α的表達無明顯影響。5.HIF-1α和CENP-W表達均與膠質瘤的病理級別呈正相關。HIF-1α可以調節(jié)CENP-W的表達。
【關鍵詞】：著絲粒蛋白W RNA 小分子干擾 缺氧誘導因子1 α亞基
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 第1章 前言11-14
• 第2章 材料與方法14-25
• 2.1 實驗材料14-17
• 2.1.1 標本來源14-15
• 2.1.2 膠質瘤細胞系來源15-16
• 2.1.3 主要材料和試劑16-17
• 2.1.4 主要儀器和設備17
• 2.2 實驗方法17-25
• 2.2.1 免疫組織化學法檢測HIF-1α 和CENP-W在腦膠質瘤中的表達17-19
• 2.2.2 細胞培養(yǎng)及氯化鈷模擬缺氧實驗19-22
• 2.2.3 實時熒光定量PCR方法檢測相關mRNA的表達22-23
• 2.2.4. HIF-1α siRNA和CENP-W siRNA轉染23-25
• 第3章 結果25-30
• 3.1 膠質瘤組織中CENP-W和HIF-1a表達呈正相關性25-27
• 3.2 氯化鈷抑制HIF-1α 分解并上調CENP-W表達27-28
• 3.3 HIF-1α siRNA抑制HIFa表達后下調CENP-W表達28-29
• 3.4 CENP-W siRNA抑制CENP-W表達后對HIF-1α 表達無影響29-30
• 第4章 討論30-34
• 第5章 結論與展望34-35
• 5.1 結論34
• 5.2 展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻36-39
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明39-40
• 綜述40-48
• 參考文獻46-48

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前1條

1 楊華;夏章勇;苗瀅;李玉芹;陶勇;;缺氧誘導因子-1a和血清促紅細胞生成素在腦出血患者中的表達及意義[J];中風與神經疾病雜志;2008年01期

  本文關鍵詞：缺氧誘導因子1α與著絲粒蛋白W在人膠質瘤組織及細胞中表達的相關性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：374625