目的： 研究三鄰甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate，TOCP）對人成神經(jīng)瘤細胞SH-SY5Y細胞分化的影響，毒性作用與自噬的關(guān)系以及自噬水平的改變，為拓寬對TOCP的神經(jīng)毒性機制的認識，進一步理解和揭示神經(jīng)退行性病變的機理提供依據(jù)。 方法： 1.選用人成神經(jīng)瘤細胞SH-SY5Y為細胞模型，MTT法檢測TOCP對SH-SY5Y細胞增殖的影響，以全反式維甲酸（ATRA）為誘導(dǎo)分化工具藥物，三甲基腺嘌呤（3-MA）為自噬抑制劑，在分化誘導(dǎo)過程中以及誘導(dǎo)分化后以不同濃度TOCP（0-1.0mmol/L）作用，動態(tài)觀察SH-SY5Y細胞形態(tài)學(xué)變化，測量細胞突起長度，統(tǒng)計已分化細胞所占比例，臺盼藍拒染法檢測死亡細胞百分比。 2.在不同濃度TOCP（0-1.0mmol/L）處理后，采用自噬小體特異染色劑單丹尸磺酰胺（MDC）對細胞進行染色觀察拍照后裂解，應(yīng)用熒光分光光度計（激發(fā)光波長380nm、發(fā)射光波長525nm）測定熒光強度進行定量分析。 3.用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染GFP-LC3質(zhì)粒至SH-SY5Y細胞，用ATRA進行誘導(dǎo)分化3天，1.0mmo... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1.材料
        1.1 細胞系及培養(yǎng)
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2. 實驗方法
        2.1 TOCP 對 SH-SY5Y 細胞的增殖影響
        2.2 TOCP 對 SH-SY5Y 細胞形態(tài)分化的影響
        2.3 TOCP 對 SH-SY5Y 細胞自噬水平的影響
        2.4 細胞骨架蛋白降解方式分析
        2.5 TOCP 對自噬相關(guān)蛋白表達的影響
結(jié)果
    1.TOCP 對 SH-SY5Y 細胞分化的影響
        1.1 TOCP 對 SH-SY5Y 細胞增殖的影響
        1.2 ATRA 誘導(dǎo) SH-SY5Y 細胞的形態(tài)學(xué)改變
        1.3 TOCP 對誘導(dǎo)中 SH-SY5Y 細胞分化的影響
        1.4 TOCP 對已分化細胞的影響
    2.TOCP 對 SH-SY5Y 細胞自噬水平的影響
        2.1 TOCP 導(dǎo)致 SH-SY5Y 細胞中自噬泡的增加
        2.2 SH-SY5Y 細胞 MDC 染色法后 OD 值比較
    3.骨架蛋白 NH-F 降解方式檢測
    4.TOCP 處理對自噬相關(guān)蛋白表達的影響
討論
結(jié)論
參考文獻
附錄 1
附錄 2 綜述
    參考文獻
附錄 3
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3691481