目的：1.構(gòu)建靶向鈣整合素結(jié)合蛋白1（calcium-and integrin-binding protein,CIB1）的慢病毒表達(dá)載體pGV-siCIB1。2.研究RNA干擾下調(diào)CIB1表達(dá)對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87細(xì)胞的生長、凋亡、遷移的作用，并探討其可能的作用機(jī)制。方法：1.針對CIB1基因序列（NM₀06384），利用RNA干擾序列的設(shè)計原則，設(shè)計針對CIB1的RNAi序列，合成單鏈DNAoligio，退火配對產(chǎn)生雙鏈，通過其兩端所含的酶切位點(diǎn)直接連入酶切后的RNAi慢病毒載體上；將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入制備好的細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞，PCR鑒定陽性重組子后，測序驗(yàn)證，測序結(jié)果經(jīng)比對確認(rèn)正確的克隆即為構(gòu)建成功的CIB1基因RNA干擾慢病毒表達(dá)載體pGV-siCIB1。2.將慢病毒表達(dá)載體感染293T細(xì)胞，進(jìn)行病毒的包裝、純化、濃縮及病毒滴度的測定。以EGFP為報告基因,分別以MOI值1,5,10,100感染細(xì)胞，觀察感染后48h、72h、96h的感染效率，確定最佳感染時間以及MOI值。3.采用MTT法檢測RNAi后CIB1對U87細(xì)胞生長的影響；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和凋亡；劃... 

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
Abstract
前言
實(shí)驗(yàn)一 靶向鈣整合素結(jié)合蛋白 CIB1 基因慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及滴度測定
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
實(shí)驗(yàn)二 RNA 干擾下調(diào) CIB1 基因表達(dá)對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87細(xì)胞生物學(xué)特性的影響
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]非小細(xì)胞肺癌組織COX-2和p53表達(dá)及其臨床意義的研究[J]. 宋娜,金波,劉云鵬,于萍.  中華腫瘤防治雜志. 2008(16)
[2]腫瘤干細(xì)胞特性研究進(jìn)展[J]. 馮海涼,劉玉琴.  腫瘤防治研究. 2008(03)



本文編號：3662714