發(fā)布時間：2022-07-15 16:46

　　目的：篩選人巨細胞病毒（human cytomegalovirus, HCMV）感染人神經膠質瘤細胞差異表達的miRNA,為進一步研究HCMV的致畸機制提供基礎。方法：用HCMV （MOI=5）感染人神經膠質瘤U251細胞株,感染后24h,48h,72h收獲細胞作為為實驗組,以模擬感染的正常細胞為對照組。用miRNA表達譜芯片技術檢測細胞的miRNA表達水平,應用軟件篩選并獲得一些差異表達明顯的miRNA,再利用Taqman探針或SYBR綠色熒光染料I （SYBR GREEN I）實時定量PCR驗證芯片結果,應用生物信息學軟件預測miRNA的靶基因,并篩選出與神經系統發(fā)育有關的靶基因。結果：與模擬感染的細胞相比,24h.p.i,48h.p.i,72h.p.i實驗組中有33個細胞miRNA表達顯著差異,其中19個表達上調均超過2倍,有hsa-miR-1275, hsa-miR-296-3p, hsa-miR-1246, hsa-miR-409-3p等；14個表達下調超過2倍,有hsa-miR-634, hsa-miR-129-3p, hsa-miR-340*, hsa-miR-769-5... 

【文章頁數】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
縮略語
前言
第一章 材料與方法
    1.1 實驗材料
        1.1.1 細胞株
        1.1.2 病毒株
        1.1.3 主要試劑及其來源
        1.1.4 主要儀器設備
        1.1.5 常用試劑的配制
    1.3 實驗方法
        1.3.1 HCMV AD169株增殖與毒力測定
        1.3.2 HCMV AD169株感染U251細胞株
        1.3.3 細胞總RNA的提取
        1.3.4 miRNA表達譜芯片雜交及數據分析
        1.3.5 實時定量PCR
        1.3.6 部分差異表達的miRNA的靶基因生物信息學分析
第二章 結果
    2.1 HCMV AD169株增殖與毒力測定
        2.1.1 HCMV AD169株感染HEL細胞致細胞病變效應
        2.1.2 HCMV TCID_(50)滴定
        2.1.3 HCMV蝕斑實驗
    2.2 總RNA質量檢測
    2.3 miRNA表達譜芯片雜交結果
    2.4 部分差異miRNA實時定量PCR驗證結果
        2.4.1 探針法實時定量PCR驗證結果
        2.4.2 染料法實時定量PCR驗證結果
    2.5 部分差異miRNA靶基因生物信息學分析
第三章 討論
    3.1 研究HCMV致畸機制的意義
    3.2 miRNA的特點及與病毒的關系
    3.3 miRNA表達譜芯片的分析
    3.4 miRNA實時定量PCR的分析
    3.5 miRNA靶基因的生物信息學分析
第四章 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
攻讀學位期間主要的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人巨細胞病毒感染對人神經干細胞定向星形膠質細胞分化過程中Notch相關信號分子表達的影響[J]. 李玲,白志強,李鵬,劉志軍,王海濤,劉海燕,姜光域,宋旭霞,錢冬萌,閆志勇,丁守怡,王斌.  醫(yī)學研究生學報. 2010(10)
[2]miRNA在HBV從感染經由肝硬化到肝癌進程中表達譜的變化[J]. 馬兆龍,楊煉,陳立波,黃金明,王冬冬,王國斌.  世界華人消化雜志. 2009(20)
[3]HCMV IE1和pp65在人神經膠質瘤U251細胞中的時序表達[J]. 李建華,傅鷹,陳利玉,戴橄,羅敏華,楊滔.  中南大學學報(醫(yī)學版). 2007(04)
[4]乙型肝炎病毒基因組轉染HepG2細胞的microRNA表達研究[J]. 劉妍,張亮,戴久增,王琳,趙建晴,徐東平.  解放軍醫(yī)學雜志. 2007(02)
[5]扶正除疫顆粒對感染流感病毒小鼠的保護作用[J]. 宮曉燕,曲曉波,王澤玉.  中藥新藥與臨床藥理. 2006(03)
[6]成人骨髓間質干細胞分化為神經元樣細胞前后基因表達的研究[J]. 姚曉黎,張成,馮善偉,盧錫林,劉祖國,鄧宇斌.  中藥材. 2005(06)
[7]HCMV感染對人神經膠質瘤細胞HOXB1～4及HOXB9基因表達影響的研究[J]. 戴橄,陳利玉,李太存,鄔國軍,羅敏華.  中國人獸共患病雜志. 2004(07)
[8]人類巨細胞病毒感染對神經膠質瘤細胞HOXB5,HOXB6,HOXB7及HOXB8基因表達的影響[J]. 鄔國軍,陳利玉,戴橄,姚孟輝,陳淑貞,舒明星,羅敏華.  湖南醫(yī)科大學學報. 2001(05)



本文編號：3662447