帕金森�。≒arkinson’s disease,PD）是繼阿爾茨海默�。ˋlzheimer’s disease,AD）之后的第二大神經(jīng)退行性疾病,是一種常見且復(fù)雜的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,其主要特征是肌僵直、靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩和姿勢反射障礙等運(yùn)動(dòng)癥狀。此外,PD患者在早期還表現(xiàn)出認(rèn)知功能障礙、精神異常和自主神經(jīng)功能障礙等一系列非運(yùn)動(dòng)癥狀。PD的主要病理特征是黑質(zhì)（substantia nigra,SN）多巴胺（dopamine,DA）能神經(jīng)元選擇性缺失,導(dǎo)致紋狀體（striatum,Str）神經(jīng)元末梢釋放DA減少,而殘存DA能神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)α-突觸核蛋白（α-synuclein,α-syn）異常聚集,形成路易小體（Lewy bodies,LBs）。PD的發(fā)病機(jī)制尚不明確,遺傳、環(huán)境、衰老、炎癥、氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙和鐵代謝異常等都可能參與到PD的發(fā)生發(fā)展中。最近的研究表明,SN區(qū)DA能神經(jīng)元上ATP敏感性鉀通道(ATP-sensitive potassium channels,K_ATP通道)的選擇性激活可能參與了PD中SN區(qū)DA能神經(jīng)元的損傷。K_ATP... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

三管玻璃微電極Fig1Schemeof3barrelglassmicroelectrode

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文61.5.3顱骨開窗用金屬耳桿將麻醉完全的小鼠俯臥位固定于腦立體定位儀，左右刻度保持一致，使其居中。用外科剪剪掉頭部毛發(fā)，用碘伏消毒處理三次，于頭部正中切開，用無菌生理鹽水暴露視野，少量雙氧水腐蝕顱骨骨膜，充分暴露前后囟位置。用電極前后左右測量，調(diào)整小鼠的鼻夾位置，從而使小鼠前后囟處在同一水平面。參考小鼠腦定位圖譜確定小鼠SN區(qū)位置：前囟后3.0-3.3mm，中線旁開1.25-1.5mm，顱骨表面下3.25-4.5mm。在顱骨表面SN區(qū)對(duì)應(yīng)區(qū)域用0.4mm的牙科鉆開窗，去掉外層顱骨，細(xì)針輕微剝除腦膜暴露大腦皮層，用生理鹽水止血后，用2%瓊脂覆蓋于暴露出的大腦皮層與顱骨表面齊平。圖2電生理記錄的實(shí)驗(yàn)裝置圖Fig2Schematicdiagramofexperimentaldevicesusedforextracellularrecordings1.5.4細(xì)胞外記錄神經(jīng)元自發(fā)放電活動(dòng)緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)腦立體定位儀豎直桿，使玻璃微電極緩慢下降；當(dāng)降至瓊脂表面時(shí)，監(jiān)視器會(huì)顯示基線變細(xì)，之后改用液壓推進(jìn)器控制電極的下降，緩慢地將電極尖端送至SN區(qū)。根據(jù)SN區(qū)定位及DA能神經(jīng)元自發(fā)放電活動(dòng)特點(diǎn)，鑒別SN區(qū)DA能神經(jīng)元。觀察DA能神經(jīng)元細(xì)胞放電穩(wěn)定5min，運(yùn)用生物細(xì)胞納升精密儀器注射器，將藥物注射到DA能神經(jīng)元表面。經(jīng)生物信號(hào)放大器放大信號(hào)，數(shù)模轉(zhuǎn)換器將信號(hào)轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號(hào)后輸入計(jì)算機(jī)，運(yùn)用Spike2軟件記錄DA能神經(jīng)元放電，實(shí)驗(yàn)裝置圖如圖2所示。細(xì)胞放電信號(hào)記錄的信噪比大于3：1可用于分析。頻率分析主要是選取加藥之前120sec的平均放電頻率（X1）作為基礎(chǔ)放電頻率，并計(jì)算出其標(biāo)準(zhǔn)差（SD），加藥后反應(yīng)頻率采用加藥后反應(yīng)高峰50sec的平均頻率（X2）。此外，我們認(rèn)為X2>X1±2SD或X2<X1±2SD認(rèn)為細(xì)胞對(duì)藥物有反應(yīng)，而X1-2SD<X2<X1+2SD認(rèn)為細(xì)胞對(duì)藥物無反應(yīng)。

材料與方法71.5.5組織學(xué)檢查每次在體細(xì)胞外電生理記錄結(jié)束后，注射2%滂胺天藍(lán)于所記錄部位（SN區(qū)）從而標(biāo)記微電極尖端位置。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將處于麻醉狀態(tài)的老鼠充分暴露心臟位置，經(jīng)小鼠左心室進(jìn)針，先灌注生理鹽水至肝臟變白，后改為冰冷4%PFA灌注。之后迅速斷頭取腦，用4%PFA過夜固定，用冰凍切片機(jī)切片（50μm），并于顯微鏡下觀察玻璃微電極尖端末端是否位于SN區(qū)（圖3A），剔除位置不正確的數(shù)據(jù)。圖3黑質(zhì)單側(cè)微量注射定位冠狀切片圖Fig3Confirmationofmicroinjectionsitesinthesubstantianigra2.腦內(nèi)立體慢病毒注射2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購買于青島藥品檢驗(yàn)所，選取8-10周C57BL/6小鼠（體重20±2g）以及4月齡A53Tα-syn轉(zhuǎn)基因小鼠，飼養(yǎng)環(huán)境為室溫23±1℃，12：12hr循環(huán)晝夜光照條件生活，自由進(jìn)食與飲水。在實(shí)驗(yàn)前讓小鼠適應(yīng)環(huán)境一周，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.2實(shí)驗(yàn)儀器儀器名稱生產(chǎn)公司冰凍切片機(jī)Leica公司，德國動(dòng)物腦立體定位儀瑞沃德公司，中國微量注射器飛鴿醫(yī)療器械公司，中國熒光顯微鏡CarlZeiss公司，德國2.3實(shí)驗(yàn)試劑（1）0.01mol/LPBS（pH7.4）配制試劑名稱生產(chǎn)公司質(zhì)量Na2HPO4·12H2O江蘇強(qiáng)盛公司，中國4gNaH2PO4·2H2O江蘇強(qiáng)盛公司，中國0.4gNaClSigma公司，美國9g

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]ATP敏感性鉀通道與帕金森病關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 杜希恂,秦康,焦倩,謝俊霞,姜宏.  生理學(xué)報(bào). 2016(05)
[2]ATP敏感性鉀通道在帕金森病中的作用（英文）[J]. 曾潔,王剛,陳生弟.  Neuroscience Bulletin. 2007(06)



本文編號(hào)：3619064