【研究背景與目的】大量研究表明,腦內(nèi)以小膠質(zhì)細(xì)胞活化為特征的慢性炎癥反應(yīng)是神經(jīng)退行性疾病的重要標(biāo)志,M1型極化的小膠質(zhì)細(xì)胞具有促進(jìn)神經(jīng)炎癥和神經(jīng)毒性的作用,而M2型極化具有抗炎和促進(jìn)組織修復(fù)作用。小膠質(zhì)細(xì)胞M1型和M2型之間的平衡對(duì)神經(jīng)炎癥性相關(guān)疾病的進(jìn)展有重要作用,因此探討小膠質(zhì)細(xì)胞在什么條件下可以從M1型促炎狀態(tài)轉(zhuǎn)變成M2型抗炎狀態(tài)將對(duì)治療這類疾病有重要啟示作用。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)PRMT2可能參與LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)炎癥反應(yīng),但是其機(jī)制不清。本研究通過觀察蛋白質(zhì)精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2（Protein arginine methyltransferase 2,PRMT2）對(duì)脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）誘導(dǎo)N9小膠質(zhì)細(xì)胞極化的影響,并探討其可能的機(jī)制,為防治神經(jīng)炎癥相關(guān)類疾病提供新的靶點(diǎn)。【方法】體外培養(yǎng)小鼠來源的N9小膠質(zhì)細(xì)胞株。將表達(dá)PRMT2的慢病毒載體LV-PRMT2（4952-1）轉(zhuǎn)染到N9小膠質(zhì)細(xì)胞上作為實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組轉(zhuǎn)染空載慢病毒載體,沒有轉(zhuǎn)染慢病毒載體的小膠質(zhì)細(xì)胞作為完全對(duì)照組。細(xì)胞自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LPS下調(diào)小膠質(zhì)細(xì)胞中PRMT2的表達(dá)Figure3.1LPSdown-regulatedPRMT2expressioninmicroglia.Relativeexpressionlevelof

14中LV-PRMT2組表示過表達(dá)PRMT2的N9小膠質(zhì)細(xì)胞；LV-empty組表示轉(zhuǎn)染空白慢病毒載體的N9小膠質(zhì)細(xì)胞。圖3.2成功轉(zhuǎn)染慢病毒載體的N9小膠質(zhì)細(xì)胞Figure3.2TheN9microgliaweresuccessfullytransfectedwiththelentiviralvector.(a)TheN9microgliasuccessfullytransfectedwithlentiviralvectorshowedgreenfluorescence.(b)RelativeexpressionlevelofPRMT2.Datawereexpressedasmean±SD(n=3).***P<0.001.3.3轉(zhuǎn)染慢病毒載體和LPS處理對(duì)N9小膠質(zhì)細(xì)胞的活力沒有影響接下來我們用MTT檢測(cè)轉(zhuǎn)染慢病毒載體是否會(huì)影響小膠質(zhì)細(xì)胞的活力，以排除病毒轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞活力的影響。結(jié)果如圖3.3所示，Control、LV-empty、LV-PRMT2這三組間的細(xì)胞活力沒有顯著差異（P＞0.05），說明轉(zhuǎn)染慢病毒載體對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的活力沒有影響。根據(jù)我們課題組的前期研究，我們選擇LPS（2μg/mL）誘導(dǎo)體外神經(jīng)炎癥模型，接下來我們檢測(cè)LPS是否對(duì)control，LV-empty，LV-PRMT2這三組的細(xì)胞活力有影響。用LPS（2μg/mL）處理各組N9小膠質(zhì)細(xì)胞6h，然后用MTT試劑盒檢測(cè)。結(jié)果如圖3.3所示：各組細(xì)胞活力均無明顯差異（P＞0.05），說明我們所選的LPS濃度不會(huì)對(duì)各組細(xì)胞造成損傷。

15因此接下來的實(shí)驗(yàn)中LPS的濃度均為2μg/mL。圖3.3轉(zhuǎn)染慢病毒載體和LPS對(duì)N9小膠質(zhì)細(xì)胞活力的影響Figure3.3EffectsoflentiviralvectortransfectionandLPSonthecellviabilityofN9microglia.Therewasnosignificantdifferenceincellviabilityamongthegroups.TransfectionwithlentiviralvectorandLPShasnoeffectontheviabilityofN9microglia.Datawereexpressedasmean±SD(n=3).3.4過表達(dá)PRMT2調(diào)控LPS處理的N9小膠質(zhì)細(xì)胞極化3.4.1過表達(dá)PRMT2抑制LPS誘導(dǎo)的N9小膠質(zhì)細(xì)胞M1型極化我們用LPS（2μg/mL）處理小膠質(zhì)細(xì)胞6h構(gòu)建體外炎癥模型，然后WB檢測(cè)各組細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)，結(jié)果如圖3.4所示：LPS處理后，與LV-empty組相比，LV-empty+LPS組細(xì)胞中iNOS、IL-6和TNF-α蛋白的表達(dá)水平均顯著性上調(diào)（P<0.001）；與LV-PRMT2組相比，LV-PRMT2+LPS組細(xì)胞中iNOS、IL-6和TNF-α蛋白的表達(dá)水平均顯著性上調(diào)（P<0.05）；與LV-empty+LPS組比較，LV-PRMT2+LPS組細(xì)胞中iNOS、IL-6和TNF-α蛋白的表達(dá)水平均顯著性下調(diào)（P<0.05）。這一結(jié)果說明LPS誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞的M1型極化并促進(jìn)炎癥因子的釋放；而過表達(dá)PRMT2可以逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞M1型極化，減少炎癥因子的分泌。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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