缺血性卒中是全球致死率和致殘率最高的三大疾病之一。炎癥反應(yīng)貫穿于缺血性卒中的整個病理過程，是影響卒中預(yù)后的主要因素之一。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中固有免疫細(xì)胞，缺血性卒中發(fā)生后，小膠質(zhì)細(xì)胞隨即被激活。過度活化小膠質(zhì)細(xì)胞具有神經(jīng)毒性，在缺血性卒中后炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞激活后產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)是目前具有前景的卒中治療新靶標(biāo)。羥基紅花黃色素A（hydroxysafflor yellow A, HSYA）是紅花黃色素的主要成分，前期研究發(fā)現(xiàn)它可以通過抑制炎癥反應(yīng)進(jìn)而減少缺血性卒中實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷哪X損傷，然而，HSYA對卒中后小膠質(zhì)細(xì)胞的直接作用尚不明確。目的：本研究意旨在氧糖剝奪（oxygen-glucose deprivation, OGD）模型中證實(shí)HSYA是否具有細(xì)胞保護(hù)與炎癥抑制作用，并探討其可能機(jī)制，為缺血性卒中的治療策略提供新思路。方法：制備OGD模型；MTT法、LDH法及流式細(xì)胞術(shù)評估細(xì)胞活力或細(xì)胞凋亡率；RT-PCR檢測炎癥因子（IL-1β、TNF-α、iNOS、COX-2和MCP-1）mRNA表達(dá)水平；western blot檢測NF-κB和MAPK通路的活性。結(jié)果：... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)設(shè)計圖

HSYA 減輕 OGD 所致的 BV2 細(xì)胞損傷.1 HSYA 對 BV2 細(xì)胞安全性檢測為明確 HSYA 對細(xì)胞活力的影響，同時檢測藥物的安全性，我們利用 BV2 細(xì)胞處理前后的細(xì)胞活力進(jìn)行評估。測得 CON 組細(xì)胞活0±4.8%。之后，分別以 HSYA20μM、40μM、80μM、160μM、320μM、6280μM處理BV2細(xì)胞，12h后，測得細(xì)胞活力分別為104.4±4.5%、100.0±±4.9%、100.1±3.8%、99.6±10.8%、105.4±6.0%、91.0±4.8%。所有數(shù)據(jù)ON 組比較后的標(biāo)準(zhǔn)化百分?jǐn)?shù)。如圖 2 所示，各組數(shù)據(jù)統(tǒng)計后無顯著0.05。本組數(shù)據(jù)表明，經(jīng)不同濃度 HSYA 處理后，BV2 細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)所均具有安全性，可根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇適當(dāng)濃度。

測得其細(xì)胞活力為 37.0±1.6%，即 OGD 處理后 BV2 細(xì)胞 組相比下降（*p < 0.05）。SYA 能夠提高 OGD 后 BV2 細(xì)胞的細(xì)胞活性。我們利用 MTT 法 作用于 BV2 細(xì)胞是否具有劑量依賴性，進(jìn)一步選擇最佳反應(yīng)濃度OGD處理后立即加入不同劑量的HSYA（即20μM、40μM、80μM、1M、640μM 和 1280μM），孵育 12h 后，利用 MTT 試驗(yàn)檢測 BV2 細(xì)，具體如下，40μM：49.7±1.3%，80μM：54.1±3.9%，160μM：62.0±3M：57.5±4.4%，640μM：59.6±2.7%，1280μM：49.0±3.8%，相較 O加（#p < 0.05，圖 3）；需要注意的是，HSYA 用量為 20μM 時， 43.3±2.6%，與 OGD 組相比較未表現(xiàn)明顯差異(#p>0.05)。本組研HSYA 的細(xì)胞保護(hù)作用具有嚴(yán)格的劑量依賴性。研究發(fā)現(xiàn)，加入 后細(xì)胞活力處于高峰值，我們選擇該劑量應(yīng)用于后續(xù)研究中。

【參考文獻(xiàn)】：
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