目的:本課題研究是以皖南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院弋磯山醫(yī)院神經(jīng)外科和南京大學附屬醫(yī)院東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)外科收治的腦膠質瘤患者的手術標本為研究對象,旨在探討轉錄因子人叉頭框蛋白O4（FOXO4）和g0/g1轉換調節(jié)蛋白3（FOSB）在膠質瘤中的表達,并進一步通過對體外膠質瘤細胞系（GBM）中FOXO4和FOSB的調控,觀察兩者對惡性細胞增殖和遷移表型的影響,尋找FOXO4和FOSB在膠質瘤中的作用,為臨床上了解和治療膠質瘤積累更多有價值的相關基礎資料。方法:首先收集臨床上確診的腦膠質瘤病人在手術中切除的腫瘤組織標本,包括低級別膠質瘤標本（病理分級為WHOⅠ級和WHOⅡ級）和高級別膠質瘤標本（病理分級為WHOⅢ級和WHOⅣ級）,再以正常腦組織標本作為實驗對照組。采用Western Blot和免疫組化染色法檢測FOXO4和FOSB在不同級別膠質瘤和正常腦組織中的表達,并統(tǒng)計分析是否有差異。然后,在體外細胞系的培養(yǎng)中進一步驗證。運用定量實時聚合酶鏈反應（qRT-PCR）和Western Blot檢測正常人星形膠質細胞系（HA）和五種膠質母細胞瘤（GBM）細胞系（U251、U118、U87、T98G、... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學院安徽省

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【學位級別】：碩士

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各級別星型膠質細胞瘤組織FOXO4的表達，標尺=30μm(免疫組化法，×400)箭頭所Ⅰ-ⅣFOXO420131-20181

21結果1FOXO4在膠質瘤中的表達及作用機制1.1FOXO4在人腦星型細胞瘤組織中的表達檢測FOXO4在人腦星型細胞瘤組織中的表達（星型膠質細胞瘤為人腦膠質瘤中最常見的一種類型），所有星型細胞瘤患者術前均未接受任何抗腫瘤治療，術后病理按WHO分級標準，用瘤周組織作為對照組。免疫組化學結果顯示，腫瘤組織FOXO4的陽性表達率比瘤周正常腦組織低（圖1）。隨機在左上角的瘤周陽性表達的細胞中選取四個細胞，測得灰度值平均值為88.72。在右下角的腫瘤組織陽性表達的細胞中選取四個細胞，測量灰度值平均值為129.75。圖1星型細胞瘤中FOXO4表達（免疫組化法×200）右側箭頭為FOXO4在腫瘤組織中陽性表達，左側箭頭為FOXO4在瘤周組織中的陽性表達。各級別膠質瘤免疫組化結果顯示，Ⅰ級星形細胞瘤的FOXO4陽性表達高于其他三種級別（Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級），且Ⅱ級星型細胞瘤組織FOXO4陽性表達高于Ⅲ級和Ⅳ級星型細胞瘤（P＜0.05）。Ⅲ級星型細胞瘤組織FOXO4陽性表達高于Ⅳ級星型細胞瘤（P＜0.05）（圖2、表1）。免疫熒光檢測結果顯示，F(xiàn)OXO4的陽性表達強度隨著腫瘤級別的升高而降低，即低級別的星型膠質細胞瘤的FOXO4陽性表達率高于高級別星型膠質瘤細胞。通過免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)FOXO4的表達定位于細胞漿和細胞核（圖3）。圖2各級別星型膠質細胞瘤組織FOXO4的表達，標尺=30μm(免疫組化法，×400)箭頭所示為Ⅰ-Ⅳ級星形膠質細胞瘤組織中FOXO4陽性表達細胞（2013年1月-2018年1月行膠質瘤手術切除的星型膠質瘤標本27例，Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級分別是5例、8例、10例、4例）。

22表1各級別星型膠質細胞瘤組織FOXO4陽性細胞的平均灰度值(sx)組別n灰度值FPWHOⅠ565.78±5.25aWHOⅡ8105.50±5.61b86.8240.000WHOⅢ10153.20±1.90cWHOⅣ4172.40±1.45d注：多組間兩兩比較。符號不同表示P＜0.05。圖3星型細胞瘤組織FOXO4陽性表達（免疫熒光×400）1.2膠質瘤組織和GBM細胞中FOXO4在mRNA和蛋白質水平的下調我們首先使用qRT-PCR和WesternBlot分別檢測了6個GBM組織、6個WHOⅡ級腫瘤組織和5個正常腦組織中FOXO4mRNA和蛋白的表達。WesternBlot結果顯示，隨著腫瘤病理分級的增加，GBM中FOXO4的表達明顯降低，即低級別膠質瘤中FOXO4的表達明顯低于正常腦組織（P＜0.01；圖4A、B）。qRT-PCR分析結果顯示，mRNA的水平，高級別膠質瘤組織標本中FOXO4表達比正常腦組織標本低約三倍（圖4C）。此外，在體外GBM細胞中，F(xiàn)OXO4mRNA水平也明顯低于HA細胞（P＜0.01；圖4D）。這一結果顯示體內外FOXO4的在膠質瘤組織和膠質瘤細胞系中的表達趨勢相同，都高于正常組織和正常膠質細胞系。


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