發(fā)布時間：2021-11-28 07:44

　　第一部分貝沙羅汀通過PPARγ介導的途徑抑制SD大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后的血管平滑肌細胞表型轉化的機制探究背景:血管平滑肌細胞在蛛網(wǎng)膜下腔出血后的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理生理過程中扮演著重要的角色。對于PPARγ介導的平滑肌細胞的表型轉化在蛛網(wǎng)膜下腔出血中的影響,目前尚未明了。本研究主要探討了貝沙羅汀通過PPARγ介導的途徑對蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦動脈的平滑肌細胞表型轉化的影響作用以及潛在的神經(jīng)血管保護機制。方法:選取成年雄性Sprague-Dawley大鼠（SD鼠）,使用血管內穿刺模型建立蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。使用改良Garcia評分（modified Garcia score）用于評估大鼠神經(jīng)功能損傷情況。使用蛛網(wǎng)膜下腔出血分級（SAH grading）,死亡率和腦水含量（brain water content）用于評估蛛網(wǎng)膜下腔出血的嚴重程度。激光散斑（Laser speckle）用于測量大腦皮層血流量。使用免疫蛋白印跡（Western blot,WB）和免疫熒光（immunofluorescence）檢測血管平滑肌細胞表型（α-SMA和Smemb）的標志物。使用WB和IF測量5-脂氧合酶活化蛋白... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

1血管內穿刺的示意圖

圖 1.1.2 載體質粒的示意圖Figure 1.1.2 Schematic diagram of vector plasmids.6.2 實驗原理RNA 干擾（RNA interference，RNAi）是與靶基因序列同源的雙鏈 RNdouble-stranded RNA，dsRNA）所誘導的一種特異性基因沉默現(xiàn)象。RNAi 技使用可以特異性地減少或關閉特定基因的表達，因此該技術已被廣泛應用于治療領域， 用于探索基因功能和傳染病以及惡性腫瘤。處理細胞內轉錄hRNA 并將其摻入 RNA 誘導的沉默復合物（RISC）中以指導核酸酶降解靶 RN毒 shRNA 載體也可用于 RNAi 干擾，具有抗生素標記的載體可繼續(xù)抑制細胞基 因的表達數(shù)周或更長時間。與其他載體相比，病毒 shRNA 載體可以成功接感染 細胞進行基因沉默，轉染效果穩(wěn)定，可以避免質粒轉染效率低下造成便。實驗目的：構建帶有 EGFP 熒光標記和目的序列的重組干擾載體。

架質粒 pHBAd-BHG，并用 LipofiterTM 轉染試劑轉染。具體步驟為：2ug 重組腺病毒載體質粒 h-SNCA，4ug 主鏈質粒 pHBAd-BHG。用 300 μl 的 DMEM 培養(yǎng)液進行稀釋，室溫放置 5 min。b．取 15 ul 的 LipofiterTM，用 300 μl 的 DMEM 培養(yǎng)液進行稀釋，室溫放置 5min。c．將兩者混和，室溫避光放置 20 min。然后將混合物加入 60mm 培養(yǎng)皿中，用 8 個字搖動，并置于 37℃含 5％CO2 的培養(yǎng)箱中。換液轉染病毒之后過 6 小時，將細胞培養(yǎng)液換為新鮮培養(yǎng)液。收毒（P1）：每天觀察細胞出毒跡象。出毒的現(xiàn)象是細胞變得更大，更圓，呈現(xiàn)葡萄狀，并開始出 現(xiàn)明顯的斑塊。大多數(shù)細胞留在病灶中并從底部脫落以進行出毒。將60mm 培養(yǎng)皿中的所有細胞和培養(yǎng)物置于 15ml 離心管中。


本文編號：3524004