工作目的:血腦屏障是由內(nèi)皮細胞、周細胞和星形膠質(zhì)細胞等構(gòu)成的復雜結(jié)構(gòu),位于腦實質(zhì)和血管系統(tǒng)之間。血腦屏障的存在主要是將中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周組織分開。為了維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的穩(wěn)態(tài)平衡。血腦屏障控制著從血液到大腦以及從大腦到血液的物質(zhì)、營養(yǎng)和細胞轉(zhuǎn)移。包括腦損傷、缺血性中風、多發(fā)性硬化癥、癲癇、帕金森病、阿爾茨海默病和重度抑郁癥在內(nèi)的多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病均發(fā)現(xiàn)了血腦屏障破壞的病理學基礎(chǔ)。血腦屏障完整性的喪失將導致循環(huán)內(nèi)的細胞因子和免疫細胞進入中樞神經(jīng)系統(tǒng),進一步激活神經(jīng)膠質(zhì)細胞并引起細胞外環(huán)境的改變,對神經(jīng)系統(tǒng)的功能造成十分嚴重的破壞。因此,在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中探索一種有效的保護血腦屏障的方法十分必要,將會為臨床上的治療提供新的思路進而改善患者預(yù)后并減輕其造成的巨大社會負擔。在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中,組蛋白去乙�；福℉istone deacetylase,HDAC）及組蛋白去乙酸化酶3（Histone deacetylase3,HDAC3）的作用已被發(fā)掘并應(yīng)用。然而不同HDAC亞型,尤其是HDAC3在神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障方面的調(diào)控作用還知之甚少。已知HDAC3在調(diào)控神經(jīng)炎癥和神經(jīng)保護方面的作用,在多種神經(jīng)... 

【文章來源】：南京大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１?ＨＢＭＥＣ中ＯＧＤ／Ｒ后促進核內(nèi)ＨＤＡＣ３表達增高并增強核內(nèi)ＨＤＡＣ３的活性

ｃａｄｈｅｒｉｎ的表達和分布情況。使用免疫熒光我們發(fā)現(xiàn)，相較于正常狀態(tài)，ＯＧＤ／Ｒ損??傷顯著降低了這些蛋白在膜上的表達水平，而使用５ｕＭ的ＲＧＦＰ９６６處理可以顯著改??善Ｃｌａｕｄｉｎ－５在細胞膜的表達（圖２－３?ａ）。進一步，我們使用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ檢測蛋白??４２??

丨！?１１１??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＯＧＤ／Ｒ?ＯＧＤ／Ｒ??＋ＲＧＦＰ９６６??圖２－２特異性抑制ＨＤＡＣ３保護ＨＢＭＥＣ在ＯＧＤ／Ｒ后發(fā)生的通透性完整性損傷。??（ａ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ檢測結(jié)果顯示，使用ＲＧＦＰ９６６特異性抑制ＨＤＡＣ３后，組蛋白??Ｈ３Ｋ９的乙�；皆龈�。（ｂ）利用ＩｍａｇｅＪ軟件對Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｓ條帶進行的灰度測??定統(tǒng)計結(jié)果。（ｃ）使用ＲＧＦＰ９６６對ＨＤＡＣ１－３干預(yù)特異性情況的活性檢測。（ｄ）??在ＨＢＭＥＣ接受ＯＧＤ／Ｒ模型中，給予ＲＧＦＰ９６６處理并使用ＨＴＣ－ｄｅｘｔｒａｎ對內(nèi)皮細胞??通透性進行滲透實驗（ｅ）在ＨＢＭＥＣ接受ＯＧＤ／Ｒ模型中，給予ＲＧＦＰ９６６處理并使??用ＴＥＥＲ實驗對內(nèi)皮細胞的完整性進行檢測。（ｆ）使用ＷＳＴ－１對細胞活性進行檢測??（ｇ）使用ＴＵＮＥＬ實驗對細胞凋亡進行檢測。（ｈ）?ＴＵＮＥＬ陽性細胞定量統(tǒng)計圖。??ｎ＝４，＊ｐ＜０．０５ｖｓ?ｎｏｒｍａｌ?ｃｏｎｔｒｏｌ，＃ｐ＜０．０５?ｖｓＯＧＤ／Ｒ。??３．３特異性抑制ＨＤＡＣ３可以恢復ＯＧＤ／Ｒ后緊密連接蛋白Ｃｌａｕｄｉｎ－５的表達??鑒于緊密連接蛋白對內(nèi)皮細胞通透性的影響，在一共２４小時的ＯＧＤ／Ｒ損傷后，??我們進一步檢測了緊密連接蛋白ＺＯ－１、Ｃｌａｕｄｉｎ－５和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ以及黏著連接蛋白ＶＥ－??ｃａｄｈｅｒｉｎ的表達和分布情況。使用免疫熒光我們發(fā)現(xiàn)，相較于正常狀態(tài)，ＯＧＤ／Ｒ損??傷顯著降低了這些蛋白在膜上的表達水平，而使用５ｕＭ的ＲＧＦＰ９６６處理可以顯著改??善Ｃｌａｕｄｉｎ－５在細胞膜的表達（圖２－３?ａ）。進一步


本文編號：3499060