[研究目的]通過(guò)甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（MSP）檢測(cè)法對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者腦脊液中6-O-甲基鳥(niǎo)嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）基因甲基化進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)膠質(zhì)瘤患者腫瘤組織中的MGMT蛋白,探討膠質(zhì)瘤患者腦脊液中MGMT基因的甲基化狀態(tài)和MGMT蛋白表達(dá)在膠質(zhì)瘤組織中的關(guān)系,從而尋求一種間接反映膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)MGMT蛋白的指標(biāo),為制定膠質(zhì)瘤患者個(gè)體化的化療方案提供理論依據(jù)。[研究方法]收集云南省腫瘤醫(yī)院2011年3月-2012年7月術(shù)前診斷疑似惡性膠質(zhì)瘤患者的腦脊液,整理記錄患者的臨床病理資料,篩選出術(shù)后病理確診為惡性膠質(zhì)瘤患者的腦脊液,采用DNA提取試劑盒（DNeasy（?） Blood&Tissue69504）提取腦脊液DNA在驗(yàn)證人基因組DNA存在后,運(yùn)用MSP技術(shù)檢測(cè)腦脊液DNA中MGMT基因啟動(dòng)子甲基化的情況。同時(shí)選用10例腦�；颊叩哪X脊液標(biāo)本做為惡性膠質(zhì)瘤患者腦脊液標(biāo)本的對(duì)照組,對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性分析。[研究結(jié)果]1.共提取腦脊液DNA55例,其中腦膠質(zhì)瘤患者組、腦�；颊呓M各為45例和10例。2.腦膠質(zhì)瘤患者組的腫瘤組織中的MGMT蛋白甲基... 

【文章來(lái)源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
中英文對(duì)照表
中文摘要
Abstract
前言
一、腦膠質(zhì)瘤中MGMT蛋白表的的檢測(cè)
    1. 材料
        1.1 研究對(duì)象
            1.1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)
            1.1.2 剔除標(biāo)準(zhǔn)
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及試劑盒
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖
        1.5 HE染色
        1.6 免疫組化
        1.7 免疫組化陽(yáng)性結(jié)果判斷
二、腦脊液DNA提取和亞硫酸氫鹽修飾
    2. 材料
        2.1 研究對(duì)象
        2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及試劑盒
        2.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.4 提取腦脊液DNA主要實(shí)驗(yàn)步驟
        2.5 利用微量紫外分光光度計(jì)測(cè)量DNA的濃度和純度
        2.6 運(yùn)用0.7%瓊脂糖凝膠電泳所提取的DNA判斷其濃度及完整性
        2.7 DNA的重亞硫酸氫鹽修飾
        2.8 結(jié)果
            2.8.1 人類基因組DNA的確認(rèn)
三、檢測(cè)腦脊液MGMT基因甲基化
    3. 材料
        3.1 研究對(duì)象
        3.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及試劑盒
        3.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4. 實(shí)驗(yàn)技術(shù)及方法
        4.1 MSP-PCR反應(yīng)
        4.2 運(yùn)用瓊脂糖凝膠電泳后成像及結(jié)果判定
        4.3 臨床資料采集及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5 結(jié)果
        5.1 惡性腦膠質(zhì)瘤中MGMT蛋白表達(dá)與腦脊液中MGMT基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的相關(guān)性分析
        5.2 惡性腦膠質(zhì)瘤中MGMT蛋白表達(dá)與性別的關(guān)系
        5.3 惡性腦膠質(zhì)瘤中MGMT蛋白表達(dá)與年齡的關(guān)系
        5.4 腦膠質(zhì)瘤患者組的腦脊液MGMT基因啟動(dòng)子甲基化率與性別的關(guān)系
        5.5 腦膠質(zhì)瘤患者組的腦脊液MGMT基因啟動(dòng)子甲基化率與年齡的關(guān)系
        5.6 腦�；颊呓M與腦膠質(zhì)瘤患者組的腦脊液MGMT基因啟動(dòng)子甲基化率的關(guān)系
四、討論
    1 膠質(zhì)瘤的診斷
    2 膠質(zhì)瘤的耐藥機(jī)制及其調(diào)節(jié)
    3 膠質(zhì)瘤腫瘤組織中MGMT蛋白的意義
    4 腦脊液中MGMT基因啟動(dòng)子甲基化的臨床意義
    5 DNA甲基化的檢測(cè)及方法的選擇
    6 試驗(yàn)中遇到的問(wèn)題及處理方式
五、結(jié)論
六、參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]神經(jīng)膠質(zhì)瘤的表觀遺傳學(xué)機(jī)制[J]. 王啟瓊,李銀,楊學(xué)習(xí).  分子診斷與治療雜志. 2011(05)
[2]DNA修復(fù)相關(guān)基因啟動(dòng)子甲基化和腫瘤化療耐藥的進(jìn)展[J]. 韓婧,李江.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2011(01)
[3]MGMT基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)在腦膠質(zhì)瘤化療中的意義[J]. 鄭長(zhǎng)青,季守平,宮鋒,李安民,邰軍利,章?lián)P培.  癌癥. 2009(06)
[4]MGMT及Topo Ⅱα在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義[J]. 魏新亭,秦晉輝,杜偉,馮文獻(xiàn),孫科.  中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志. 2008(12)
[5]腦膠質(zhì)瘤循環(huán)標(biāo)志物[J]. 林毅,江濤.  中國(guó)現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志. 2008(05)
[6]人體游離循環(huán)DNA的研究進(jìn)展[J]. 胡影,倪虹.  遺傳. 2008(07)
[7]DNA甲基化研究方法的回顧與評(píng)價(jià)[J]. 顧婷婷,張忠明,鄭鵬生.  中國(guó)婦幼健康研究. 2006(06)
[8]MGMT在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中表達(dá)的臨床意義及聯(lián)合應(yīng)用STZ對(duì)愈后的影響[J]. 胡蘋(píng),婁晉寧,章?lián)P培,馬雄君,趙奎明.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2006(01)
[9]我國(guó)膠質(zhì)瘤診斷治療現(xiàn)狀和努力方向[J]. 陳忠平,周旺寧.  中國(guó)腫瘤. 2005(02)
[10]人腦膠質(zhì)瘤腫瘤標(biāo)志物研究現(xiàn)狀[J]. 王先祥,馮春國(guó),李長(zhǎng)元.  安徽醫(yī)學(xué). 2004(06)

碩士論文
[1]惡性膠質(zhì)瘤組織MGMT基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)及蛋白表達(dá)與患者臨床預(yù)后的相關(guān)性研究[D]. 羅敏捷.南方醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3482509